三七總皂苷對內(nèi)毒素休克大鼠心肌保護(hù)作用機(jī)制的研究.pdf

1、感染性休克是常見危急重癥，其病死率高達(dá)50％-60％以上。革蘭陰性菌感染是常見原因，LPS在休克的發(fā)生和維持中扮演重要角色。休克發(fā)生后，細(xì)菌可以通過抗菌素殺滅，但殺滅后細(xì)菌裂解釋放LPS，LPS與LBP結(jié)合后，被呈遞給細(xì)胞表面CD14受體，通過糖基-磷脂酰肌醇定位于細(xì)胞表面上，但CD14缺乏跨膜及細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域，不能將信號傳遞到細(xì)胞內(nèi)，只能通過結(jié)合跨膜信號傳導(dǎo)蛋白發(fā)揮作用。TLR即是關(guān)鍵的跨膜信號傳導(dǎo)蛋白，而TLR4是人類TLR的同源變體

2、，它存在于單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、心肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞，是參與天然免疫的關(guān)鍵受體。在MD2的參與下，LPS-CD14與TLR4結(jié)合，將信息傳遞到胞內(nèi)，TLR4胞內(nèi)區(qū)與蛋白-MyD88結(jié)合使MyD88活化，活化的MyD88結(jié)合于IRAK，并使后者活化，活化的IRAK結(jié)合于TRAF6可使TAK1活化，相繼使NIK、I-kB活化，從而使I-kB與NF-kB分離，激發(fā)基因轉(zhuǎn)錄，使TNF-a合成釋放增加，然后誘導(dǎo)其它炎癥因子(如IL-

3、1、IL-6等)釋放，導(dǎo)致細(xì)胞線粒體、溶酶體損傷，微循環(huán)衰竭，進(jìn)而引起心、肺、肝、腎、腸道等多器官功能損害，其中心肌受損引起心功能損害是導(dǎo)致休克的重要因素。eTnI是心肌細(xì)胞特有的結(jié)構(gòu)蛋白，是反應(yīng)感染性休克時心肌細(xì)胞受損的可靠指標(biāo)，具有高度敏感性和特異性。 中醫(yī)認(rèn)為，內(nèi)毒素休克相當(dāng)于厥脫證。由于感受外邪，內(nèi)陷營血，耗傷氣血，致熱、毒、瘀互結(jié)，致臟腑功能衰竭，陰陽離決，陽氣外脫，解毒活血為其主要治法。 三七具有活血散瘀止血

4、、止血不留瘀、解毒消腫作用?，F(xiàn)代研究表明，三七主要成分為三七總皂苷，其中人參皂苷Rb1具有抗炎、止痛作用，人參皂苷Rg1和三七皂苷R1具有抗血小板聚集、抗血栓形成作用。動物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)三七總皂苷對內(nèi)毒素休克大鼠心肌具有保護(hù)作用，深入探討其作用機(jī)理具有重要臨床意義。 本研究分為整體動物實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)兩部分： 1．整體動物實(shí)驗(yàn)部分 1.1 目的：觀察三七總皂苷抗內(nèi)毒素休克的療效，并初步探討其抗內(nèi)毒素休克的機(jī)制。

5、 1.2方法：將SD大鼠隨機(jī)分為生理鹽水組、內(nèi)毒素組、三七總皂苷小劑量組、三七總皂苷大劑量組、燈盞細(xì)辛組、牛磺酸組，相關(guān)藥物處理3天后復(fù)制內(nèi)毒素休克模型，觀察動物平均動脈壓、心率、左室收縮壓，檢測血清cTnI、血清及心肌組織TNF-a、及應(yīng)用RT-PCR檢測心肌組織TIR4mRNA表達(dá)。 1.3 結(jié)果：三七總皂苷1)可以明顯改善內(nèi)毒素休克大鼠左室收縮壓，對穩(wěn)定血壓及心率具有重要作用，可延緩休克的發(fā)生。2)可以明顯降低內(nèi)毒素休克

6、大鼠血清cTnI含量。3)抑制心肌TLR4mRNA表達(dá)，從而抑制血清及心肌TNF-a生成。 1.4 結(jié)論：三七總皂苷通過心肌組織TLR4mRNA表達(dá)，進(jìn)而抑制血清及心肌組織TNF-α生成，減輕心肌細(xì)胞損傷，達(dá)到穩(wěn)定血壓及心率，改善心功能作用。 2. 體外實(shí)驗(yàn)部分 2.1 目的：觀察三七總皂苷血清對內(nèi)毒素誘導(dǎo)心肌細(xì)胞損傷的影響，初步探討其可能的機(jī)制。 2.2 方法：制備三七總皂苷等藥物血清，并進(jìn)行心肌細(xì)胞培

7、養(yǎng)。將培養(yǎng)的乳鼠心肌細(xì)胞分為6組，對照組加入制備的lO％生理鹽水動物血清，其余5組分別加入10％生理鹽水、三七總皂苷小劑量、三七總皂苷大劑量、燈盞細(xì)辛、?；撬釀游镅澹囵B(yǎng)48h后再予內(nèi)毒素刺激，用MTT法觀察他們對心肌細(xì)胞增值的影響。應(yīng)用免疫組化檢測上述動物血清對內(nèi)毒素刺激后心肌細(xì)胞TNF-α、TLR4蛋白表達(dá)的影響。 2.3 結(jié)果：三七總皂苷藥物血清1)可明顯抑制內(nèi)毒素誘導(dǎo)心肌細(xì)胞損傷；2)抑制內(nèi)毒素刺激后心肌細(xì)胞TNF-α