竹節(jié)參總皂苷對(duì)急性心肌梗死大鼠的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：通過結(jié)扎大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支建立大鼠急性心肌梗死模型，研究竹節(jié)參總皂苷對(duì)大鼠急性心肌梗死的保護(hù)作用，并初步探尋其可能的作用機(jī)制；通過H2O2誘導(dǎo)H9c2心肌細(xì)胞株氧化應(yīng)激損傷模型，研究竹節(jié)參總皂苷對(duì)H9c2心肌細(xì)胞株的保護(hù)作用,進(jìn)一步明確其對(duì)急性心肌梗死的保護(hù)作用機(jī)制。
　　方法：(1)實(shí)驗(yàn)一:采用結(jié)扎大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支建立大鼠急性心肌梗死模型,將手術(shù)后成活的大鼠隨機(jī)分為模型組、竹節(jié)參總皂苷低、高劑量組,另取假手術(shù)的大鼠作

2、為假手術(shù)組,竹節(jié)參總皂苷低、高劑量組大鼠分別灌胃給予50mg/kg、100mg/kg的竹節(jié)參總皂苷,假手術(shù)組和模型組給予相應(yīng)體積的生理鹽水,每天1次,連續(xù)給藥1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。記錄完血壓和心功能檢測(cè)后,打開大鼠腹腔,腹后腔主動(dòng)脈取血,分離血清,進(jìn)行乳酸脫氫酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活性及丙二醛(MDA)含量檢測(cè);取血完畢后,快速取出大鼠心臟,用生理鹽水洗去殘留血液,用潔

3、凈紗布吸干水分后,進(jìn)行全心拍照和稱重;然后切取心肌組織經(jīng) HE、Masson和電鏡染色后分別進(jìn)行心肌梗塞面積和心肌組織顯微和超微形態(tài)分析,另取一部分心臟組織用Real-time PCR技術(shù)進(jìn)行HO-1、Txn-1、Txnrd-1、GCLc及Nrf2 mRNA的表達(dá)分析。(2)實(shí)驗(yàn)二:培養(yǎng) H9c2心肌細(xì)胞株,用H2O2誘導(dǎo)其氧化應(yīng)激損傷,實(shí)驗(yàn)組隨機(jī)分為正常組、模型組(H2O2)、竹節(jié)參總皂苷低劑量組(H2O2+50μg/mL)和竹節(jié)參總

4、皂苷高劑量組(H2O2+100μg/mL),竹節(jié)參總皂苷低、高劑量組孵育24小時(shí),MTT法檢測(cè) H9c2心肌細(xì)胞存活率,比色法測(cè)定其培養(yǎng)液中LDH和MDA含量,同時(shí)檢測(cè)培養(yǎng)液中SOD、CAT及GSH-Px的活性;Hoechst33342染色觀察 H9c2心肌細(xì)胞株凋亡形態(tài),熒光顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi) ROS的熒光強(qiáng)度;流式細(xì)胞儀檢測(cè)竹節(jié)參總皂苷對(duì)氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡;Real-time PCR測(cè)定 Bcl-2、Bax和Caspase-3的表

5、達(dá),并計(jì)算 Bcl-2與 Bax的比值。
　　結(jié)果：(1)實(shí)驗(yàn)一:竹節(jié)參總皂苷能夠明顯改善急性心肌梗死大鼠的心功能,表現(xiàn)為降低左心室舒張末期壓(LVEDP),增大收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、平均動(dòng)脈壓(MAP)、左室壓上升最大速率(LV+dp/dt max)、左室壓下降最大速率(LV-dp/dt max)和左心室收縮壓(LVSP)(P<0.05,P<0.01);竹節(jié)參總皂苷低、高劑量組能明顯降低心臟重量指數(shù)和梗死面積(P<

6、0.05,P<0.01);竹節(jié)參總皂苷低、高劑量組能明顯降低血清中LDH的含量及MDA的含量,升高血清中SOD、CAT和GSH-Px酶的活性(P<0.05,P<0.01);HE染色觀察發(fā)現(xiàn):竹節(jié)參總皂苷低、高劑量組能夠明顯改善炎癥的浸潤,心肌纖維排列較整齊;電鏡觀察發(fā)現(xiàn):竹節(jié)參總皂苷低、高劑量組能改善線粒體的形態(tài);心肌的Real-time PCR分析發(fā)現(xiàn):竹節(jié)參總皂苷低、高劑量組均能上調(diào) HO-1、Txn-1、Txnrd-1、GCLc及

7、Nrf2的表達(dá)。(2)實(shí)驗(yàn)二:竹節(jié)參總皂苷能顯著增加 H2O2致氧化損傷心肌細(xì)胞存活率,降低細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH和MDA的含量,升高 SOD、CAT和GSH-Px的活性(P<0.05,P<0.01);Hoechst33342染色觀察發(fā)現(xiàn),竹節(jié)參總皂苷低、高劑量組能夠明顯改善細(xì)胞凋亡形態(tài);熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)竹節(jié)參總皂苷低、高劑量組明顯降低細(xì)胞內(nèi)的ROS熒光強(qiáng)度;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)竹節(jié)參總皂苷低、高劑量組明顯降低細(xì)胞凋亡率;Real-time