竹節(jié)參總皂苷對急性心肌梗死大鼠的保護作用及機制研究.pdf

1、目的：通過結(jié)扎大鼠左冠狀動脈前降支建立大鼠急性心肌梗死模型，研究竹節(jié)參總皂苷對大鼠急性心肌梗死的保護作用，并初步探尋其可能的作用機制；通過H2O2誘導(dǎo)H9c2心肌細胞株氧化應(yīng)激損傷模型，研究竹節(jié)參總皂苷對H9c2心肌細胞株的保護作用,進一步明確其對急性心肌梗死的保護作用機制。
　　方法：(1)實驗一:采用結(jié)扎大鼠左冠狀動脈前降支建立大鼠急性心肌梗死模型,將手術(shù)后成活的大鼠隨機分為模型組、竹節(jié)參總皂苷低、高劑量組,另取假手術(shù)的大鼠作

2、為假手術(shù)組,竹節(jié)參總皂苷低、高劑量組大鼠分別灌胃給予50mg/kg、100mg/kg的竹節(jié)參總皂苷,假手術(shù)組和模型組給予相應(yīng)體積的生理鹽水,每天1次,連續(xù)給藥1周后進行實驗。記錄完血壓和心功能檢測后,打開大鼠腹腔,腹后腔主動脈取血,分離血清,進行乳酸脫氫酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活性及丙二醛(MDA)含量檢測;取血完畢后,快速取出大鼠心臟,用生理鹽水洗去殘留血液,用潔

3、凈紗布吸干水分后,進行全心拍照和稱重;然后切取心肌組織經(jīng) HE、Masson和電鏡染色后分別進行心肌梗塞面積和心肌組織顯微和超微形態(tài)分析,另取一部分心臟組織用Real-time PCR技術(shù)進行HO-1、Txn-1、Txnrd-1、GCLc及Nrf2 mRNA的表達分析。(2)實驗二:培養(yǎng) H9c2心肌細胞株,用H2O2誘導(dǎo)其氧化應(yīng)激損傷,實驗組隨機分為正常組、模型組(H2O2)、竹節(jié)參總皂苷低劑量組(H2O2+50μg/mL)和竹節(jié)參總

4、皂苷高劑量組(H2O2+100μg/mL),竹節(jié)參總皂苷低、高劑量組孵育24小時,MTT法檢測 H9c2心肌細胞存活率,比色法測定其培養(yǎng)液中LDH和MDA含量,同時檢測培養(yǎng)液中SOD、CAT及GSH-Px的活性;Hoechst33342染色觀察 H9c2心肌細胞株凋亡形態(tài),熒光顯微鏡觀察細胞內(nèi) ROS的熒光強度;流式細胞儀檢測竹節(jié)參總皂苷對氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的細胞凋亡;Real-time PCR測定 Bcl-2、Bax和Caspase-3的表

5、達,并計算 Bcl-2與 Bax的比值。
　　結(jié)果：(1)實驗一:竹節(jié)參總皂苷能夠明顯改善急性心肌梗死大鼠的心功能,表現(xiàn)為降低左心室舒張末期壓(LVEDP),增大收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、平均動脈壓(MAP)、左室壓上升最大速率(LV+dp/dt max)、左室壓下降最大速率(LV-dp/dt max)和左心室收縮壓(LVSP)(P<0.05,P<0.01);竹節(jié)參總皂苷低、高劑量組能明顯降低心臟重量指數(shù)和梗死面積(P<

6、0.05,P<0.01);竹節(jié)參總皂苷低、高劑量組能明顯降低血清中LDH的含量及MDA的含量,升高血清中SOD、CAT和GSH-Px酶的活性(P<0.05,P<0.01);HE染色觀察發(fā)現(xiàn):竹節(jié)參總皂苷低、高劑量組能夠明顯改善炎癥的浸潤,心肌纖維排列較整齊;電鏡觀察發(fā)現(xiàn):竹節(jié)參總皂苷低、高劑量組能改善線粒體的形態(tài);心肌的Real-time PCR分析發(fā)現(xiàn):竹節(jié)參總皂苷低、高劑量組均能上調(diào) HO-1、Txn-1、Txnrd-1、GCLc及

7、Nrf2的表達。(2)實驗二:竹節(jié)參總皂苷能顯著增加 H2O2致氧化損傷心肌細胞存活率,降低細胞培養(yǎng)液中LDH和MDA的含量,升高 SOD、CAT和GSH-Px的活性(P<0.05,P<0.01);Hoechst33342染色觀察發(fā)現(xiàn),竹節(jié)參總皂苷低、高劑量組能夠明顯改善細胞凋亡形態(tài);熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)竹節(jié)參總皂苷低、高劑量組明顯降低細胞內(nèi)的ROS熒光強度;流式細胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)竹節(jié)參總皂苷低、高劑量組明顯降低細胞凋亡率;Real-time