從MAPK-NF-κB通路介導的炎癥反應研究竹節(jié)參總皂苷對自然衰老大鼠結(jié)腸屏障功能障礙的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的：研究竹節(jié)參總皂苷（SPJ）對自然衰老大鼠結(jié)腸屏障功能的調(diào)節(jié)作用及其分子機制。
　　方法：
　　(1)以自然衰老大鼠為研究對象，將SPF級SD雄性大鼠按照月齡分為青年組（6月齡）、自然衰老組（24月齡）和竹節(jié)參總皂苷低、中、高劑量組，每組15只大鼠。SD雄性大鼠從18月齡開始，SPJ低、中、高劑量組分別給與竹節(jié)參總皂苷10 mg/kg、30 mg/kg、60 mg/kg，對照組給與生理鹽水，灌胃至24月齡，每灌胃6天停藥

2、1天，持續(xù)6個月。
　　(2)免疫組化法檢測結(jié)腸緊密連接蛋白Claudin-1和Occludin蛋白表達的變化；
　　(3) D-乳酸試劑盒檢測血清D-乳酸水平的變化。
　　(4) PCR法檢測結(jié)腸炎癥因子白細胞介素-1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）的mRNA水平。
　　(5) Western Blot法檢測結(jié)腸炎癥因子IL-1β、TNF-α、結(jié)腸炎癥相關蛋白環(huán)氧化酶-2（COX-2）、P38絲裂

3、原活化蛋白激酶（P38 MAPK）細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、核因子kB p65（NF-κB p65）表達水平的變化。
　　結(jié)果：
　　(1)免疫組化結(jié)果顯示：與青年組比較，自然衰老大鼠結(jié)腸緊密連接蛋白Claudin-1和Occludin蛋白表達減少，而竹節(jié)參總皂苷提前干預組與自然衰老組比較Claudin-1和Occludin蛋白表達顯著升高。
　　(2)D-乳酸試劑盒檢測結(jié)果

4、顯示：與青年組比較，自然衰老大鼠血清D-乳酸水平顯著升高而竹節(jié)參總皂苷各劑量組D-乳酸水平與自然衰老組比較有所降低，其中高劑量組有顯著性差異。
　　(3) PCR法結(jié)果顯示自然衰老組結(jié)腸炎癥因子IL-1β、TNF-α的mRNA水平與青年組比較顯著升高而竹節(jié)參總皂苷各劑量組IL-1β、TNF-α的mRNA水平與自然衰老組比較顯著降低。
　　(4) Western Blot法結(jié)果顯示與青年組比較，自然衰老組結(jié)腸炎癥因子IL-1β

5、、TNF-α、結(jié)腸炎癥相關蛋白COX-2 MAPK/NF-κB通路相關蛋白表達水平均顯著升高，而竹節(jié)參總皂苷干預組結(jié)腸炎癥因子IL-1β、TNF-α、結(jié)腸炎癥相關蛋白COX-2和MAPK/NF-κB通路相關蛋白表達水平均顯著，結(jié)腸炎癥相關蛋白COX-2和MAPK/NF-κB通路相關蛋白表達水平顯著下降。
　　結(jié)論：自然衰老大鼠結(jié)腸屏障功能發(fā)生障礙，形態(tài)發(fā)生改變，結(jié)腸緊密連接蛋白表達減少，血清D-乳酸水平降低，這種改變可能與其增強的