宮頸癌組織中人類皰疹病毒6型(HHV-6)和人乳頭瘤病毒(HPV)的檢測(cè)及其臨床意義.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文宮頸癌組織中人類皰疹病毒6型(HHV-6)和人乳頭瘤病毒(HPV)的檢測(cè)及其臨床意義姓名：宋悅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：侯香圃20000401儀，北京六一儀器廠生產(chǎn)D Y Y - - Ⅲ2 穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀。實(shí)驗(yàn)方法1 、組織D N A 的提取：采用酚：氯仿：異戊醇常規(guī)提取法。2 、P C R 擴(kuò)增：H H V 一6 檢測(cè)采用巢式P C R ，外引物為H 6 —8 ，H 6 —6 ，內(nèi)引物為H 6

2、—6 ，H 6 一a ／7 。兩次擴(kuò)增的反應(yīng)條件及試劑均相同。首先9 4 ℃變性3 m i n ，然后9 4 “ C 變性4 5 s - - ·6 0 。C 退火6 0 S一7 2 ℃延伸6 0s ，共3 5 個(gè)循環(huán)，最后7 2 ℃延伸7r a i n 。H P V 檢測(cè)用P C R 。引物為H P V E 6 —1 和H P V E 6 —2 ，反應(yīng)條件為9 5 ℃變性3 0s 一5 5 ℃退火1 5 s 一7 0 ℃延伸1

3、 5s ，共3 5 個(gè)循環(huán)，最后7 2 ℃延伸7 m i n 。3 、結(jié)果判定H H V 一6 第一次擴(kuò)增產(chǎn)物陽(yáng)性條帶為5 4 9 b p ，第二次擴(kuò)增陽(yáng)性條帶為1 1 2 b p ，H P VD N A 陽(yáng)性條帶則為3 0 0 b p 。4 、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用x 2 檢驗(yàn)或四格表精確概率法。結(jié) 果1 ．正常及病變宮頸組織中H H V 一6 和H P V E 6D N A 的表達(dá)情況C I N Ⅲ級(jí)和宮頸浸潤(rùn)癌組織中H H V 一6 總表

4、達(dá)率為6 1 ．7 6 ％( 2 1 ／3 4 ) ，明顯高于正常組和炎癥組，差異非常顯著( p < o ．0 1 ) ，也明顯高于C I NI 一Ⅱ級(jí)( P < o ．0 5 ) 。H P VE 6 的總表達(dá)率為7 6 ．4 7 ％( 2 6 ／3 4 ) ，明顯高于正常組和炎癥組，差異非常顯著( p < 0 ．0 1 ) 。并且，從正常到C I N Ⅲ級(jí)隨著病變的逐步發(fā)展，二者表達(dá)率均呈遞增趨勢(shì)。在正常組、炎癥組、