不同時間灌服氨氯地平對大鼠內(nèi)皮源性血管活性物質(zhì)近日節(jié)律的影響.pdf

1、目的：人體的絕大多數(shù)生理生化現(xiàn)象都一直處于一種動態(tài)的周期性變化過程中，當這些過程以24小時為周期反復(fù)發(fā)生時，即被稱為近日節(jié)律(Circadian Rhythm)或晝夜節(jié)律(Diurnal Rhythm)。心血管系統(tǒng)的多種生理活動和疾病均表現(xiàn)為近日節(jié)律。時間治療學(xué)(Chronotherapy)是根據(jù)疾病發(fā)生發(fā)作的節(jié)律特點對其進行防治，對其采取擇時治療的一種方法。 研究表明，內(nèi)皮素(ET)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合成酶(NOS)

2、等物質(zhì)的血漿濃度或活性均存在晝夜節(jié)律現(xiàn)象，且其時間生物學(xué)特征與心血管系統(tǒng)疾病的晝夜分布密切相關(guān)。因此，充分認識這類生物節(jié)律，對于深入理解血管內(nèi)皮功能與心血管系統(tǒng)生理現(xiàn)象及病理事件的關(guān)系具有重要意義，對于改善心血管疾病的治療現(xiàn)狀、減少惡性心臟事件的發(fā)生亦具有重要價值。目前僅有少數(shù)學(xué)者對上述物質(zhì)的分子表達水平的近日節(jié)律作了研究，且氨氯地平對血管活性物質(zhì)的時間生物學(xué)(Chronobiology)特征的影響亦有待于深入探討。 在此背景下

3、，我們以氨氯地平不同時間灌服方案為干預(yù)因素，檢測不同服藥時間對大鼠血清及心肌組織ET-1、NO、NOS的表達量，及心肌組織中eNOS基因表達量的晝夜節(jié)律的影響，旨在探討上述血管活性物質(zhì)的近日節(jié)律特征及不同時間灌服氨氯地平對其的影響，從分子水平解釋不同灌藥時間對大鼠上述指標近日節(jié)律的影響，為心血管疾病及其并發(fā)癥的防治提供一個新思路。方法：清潔級健康雄性SD大鼠128只。隨機分為四大組：早07:00灌藥組(MT)，晚07:00灌藥組(NT)

4、，早07:00對照組(MC)和晚07:00對照組(NC)。灌藥組每日給予氨氯地平2.5mg/Kg灌胃，對照組每日給予同等容量的蒸餾水。每大組各32只。每大組又隨機分4小組，每組各8只。按上述方案飼養(yǎng)喂藥4周后，分別于同日24小時內(nèi)不同時間點(02:00，08:00，14:00，20:00)處死MT組、NT組、MC組、NC組中的各一小組大鼠。分別檢測大鼠血漿及心肌組織ET-1、血清及心肌組織NO、eNOS的表達量以及心肌組織eNOS-mR

5、NA的表達水平。應(yīng)用余弦擬合法分析4組實驗動物血清及心肌組織中各指標含量的時間生物學(xué)特征，采用零振幅檢驗(zero amplitude test)評價各檢測指標的近日節(jié)律是否確實存在，應(yīng)用方差分析法比較各均值之間差異的顯著性，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果： 1.方差分析顯示，血漿、心肌組織中ET-1表達量的晝夜平均水平：MT組和NT組低于MC和NC組，并有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)，而MT與NT、MC與NC之

6、間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。提示氨氯地平可以影響大鼠ET-1的表達量：早晚不同時間喂藥大鼠血漿、心肌組織中ET-1水平顯著降低；早晚喂藥對ET-1的影響無差別。 2.方差分析顯示，血清、心肌組織中NO、eNOS表達量的晝夜平均水平：MT組和NT、組NO表達量高于MC和NC組，而MT與NT、MC與NC之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)：MT組和NT組eNOS表達量高于MC和NC組，而MT與NT、MC與NC之間的差異無

7、統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。提示氨氯地平可以影響大鼠NO、eNOS的表達量：早晚不同時間喂藥大鼠血漿、心肌組織中NO、eNOS水平均顯著增加；早晚喂藥對其影響無差別。 3不同時間灌服氨氯地平后，大鼠心肌組織eNOS-mRNA表達量的平均水平，方差分析顯示：MT組和NT組高于MC和NC組，并有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.01)，而MT與NT、MC與NC之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。 4余弦擬合分析及零振幅檢驗顯示，四組大鼠血漿E

8、T-1、血清NO、eNOS及心肌組織中ET-1、NO、eNOS的檢測值均呈現(xiàn)出典型的近日節(jié)律性。MC組血漿ET-1、血清NO、eNOS的峰值及振幅水平與NC組相同，MC組血漿ET-1、血清NO、eNOS的峰值依次出現(xiàn)于22:28、10:40、7:51；NC組血漿ET-1、血清NO、eNOS的峰值依次出現(xiàn)于22:22、10:36、8:40。MT組三者的峰值較MC、NC組提前出現(xiàn)，峰值時刻分別為16:41、7:28、4:29，NT組三者的峰

9、值較MC、NC組延遲出現(xiàn)，分別為2:16、15:50、12:36。MT、NT組的血漿ET-1、血清NO、eNOS的余弦曲線的振幅與MC、NC組基本一致。心肌組織中ET-1、NO、eNOS的余弦擬合曲線的節(jié)律的峰值時刻及振幅水平與血清的趨勢基本一致，MC組心肌組織ET-1、NO、eNOS的峰值依次出現(xiàn)于01:49、14:33、12:37，NC組心肌組織ET-1、NO、eNOS的峰值依次出現(xiàn)于02:13、15:03、12:29，MT組的峰值

10、提前出現(xiàn)，三者的峰值時刻依次為22:23、10:17、09:06，NT組三者峰值延遲，時刻依次為04:46、20:39、16:50。 6余弦擬合分析及零振幅檢驗顯示，MC組、NC組、MT組、NT組大鼠心肌組織中eNOS-mRNA呈現(xiàn)出典型的近日節(jié)律性。MC組、NC組大鼠心肌組織中eNOS-mRNA的峰值分別出現(xiàn)于12:37、12:29，MT、組、NT組的峰值分別位于09:06、16:50。四組的振幅沒有明顯變化。 結(jié)論：

11、 1未灌藥的大鼠血漿、心肌組織中ET-1、NO、eNOS的表達量存在典型的晝夜節(jié)律特征，心肌組織中eNOS-mRNA的表達也呈現(xiàn)明顯晝夜節(jié)律。 2不同時間灌服氨氯地平后，大鼠血漿、心肌組織中ET-1、NO、eNOS及eNOS-mRNA的表達均顯示晝夜節(jié)律，但大鼠血漿、心肌組織中ET-1含量明顯降低，NO、eNOS及心肌組織中eNOS-mRNA含量明顯升高，而在早晚給藥組之間及早晚對照組之間上述物質(zhì)的水平均無顯著差別。 3