不同時間灌服纈沙坦對大鼠內皮素與一氧化氮近日節(jié)律的影響.pdf

1、目的：生物節(jié)律是生物體周期性、規(guī)律性的生命活動現(xiàn)象，是生物體的基本特征之一，也是生物體重要的生命活動調節(jié)方式。在人類和其他動物中，大腦內形成的內在生物鐘可調節(jié)睡眠周期、體溫、血壓波動周期以及各種內分泌腺體的分泌節(jié)律等重要生命活動。依照節(jié)律的周期長短可將之分為三種類型：1、近日節(jié)律(Circadian Rhythm，或稱晝夜節(jié)律，Diurnal Rhythm)，節(jié)律周期接近24小時；2、超日節(jié)律(Ultradian Rhythm)，節(jié)律周

2、期明顯短于24小時；3、亞日節(jié)律(Infradian Rhythm)，節(jié)律周期顯著長于24小時。在人類最為常見且研究最多的是近日節(jié)律<'[1]>。人體血壓呈現(xiàn)為典型的近日節(jié)律性，充分認識血壓的生物節(jié)律的調節(jié)機制對于更好的防治高血壓病具有重要意義。血壓水平的調節(jié)是一個非常復雜的過程。在這個過程中，內皮系統(tǒng)以及其他血管活性物質等起著至關重要的作用。近年來心血管領域最重要的研究進展之一在于闡明了血管內皮活性因子在調節(jié)心臟、循環(huán)功能和內環(huán)境穩(wěn)定

3、中的作用，如保持血管張力、抑制血小板聚集、維持機體凝血纖溶平衡、降低血管內皮通透性、減少黏附分子的表達、抑制血管平滑肌增殖等。研究表明，內皮素(ET)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)等物質的血漿濃度或活性均存在晝夜節(jié)律現(xiàn)象，且其時間生物學特征與心血管系統(tǒng)疾病的晝夜分布密切相關。因此，充分認識這類生物節(jié)律，對于深入理解血管內皮功能與心血管系統(tǒng)生理現(xiàn)象及病理事件的關系具有重要意義，對于改善心血管疾病的治療現(xiàn)狀、減少惡性心臟事件的發(fā)

4、生亦具有重要價值。目前僅有少數(shù)作者對上述物質的分子表達水平的近日節(jié)律作了研究，血管活性物質的晝夜波動與血壓晝夜節(jié)律之間的關系亦有待深入探討，且纈沙坦對血管活性物質的時間生物學(Chronobiology)特征的影響亦有待于深入探討。本研究以纈沙坦不同喂藥時間方案為干預因素，檢測不同服藥時間對大鼠血清及心肌組織ET-1、NO、NOS的表達量，及心肌組織中eNOS基因表達量的晝夜節(jié)律的影響，分析三組對象上述指標近日節(jié)律特征與血壓的晝夜節(jié)律性

5、及其相互關系，對從分子水平解釋不同服藥時間對大鼠動脈血壓的近日節(jié)律的影響，甚至進一步解釋人類血壓近日節(jié)律的變化與不同服藥時間的關系的分子生物學機制；對調整高血壓患者服藥時間，糾正異常的生物節(jié)律，恢復血壓的生理波動將具有重要價值。為高血壓病及其并發(fā)癥的防治提供一個新思路。 方法：清潔級健康雄性SD大鼠96只。隨機分為三大組：早07：00灌藥組(M)，晚07：00灌藥組(N)和空白對照組(C)。灌藥組每日給予纈沙坦30mg/Kg灌胃

6、。每大組各32只。每大組又隨機分4小組，每組各8只。按上述方案飼養(yǎng)喂藥4周后，分別于同日24小時內不同時間點(02：00，08：00，14：00，20：00) 用鼠尾測壓計測各組大鼠血壓并處死C組、M組、N組中的各一小組大鼠。分別檢測大鼠血漿及心肌組織ET-1、血清及心肌組織NO、eNOS的表達量以及心肌組織eNOS-mRNA的表達水平。應用余弦擬合法分析3組實驗動物血清及心肌組織中各指標含量的時間生物學特征，采用零振幅檢驗(zero

7、amplitude test)評價各檢測指標的近日節(jié)律是否確實存在，應用方差分析法比較各均值之間差異的顯著性，P≤0.05視為有統(tǒng)計學顯著性差異。 結果： 1 方差分析顯示，血漿、心肌組織中ET-1表達量的晝夜平均水平：M組和N組低于C組，并有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，而M、N兩組之間的差異無統(tǒng)計學意義(P=0.215)。提示纈沙坦可以影響大鼠ET-1的表達量：早晚不同時間喂藥大鼠血漿、心肌組織中ET-1水平顯著降低；

8、早晚喂藥組間對ET-1的影響無差別。 2 方差分析顯示，血清、心肌組織中NO、eNOS表達量的晝夜平均水平：M組和N組高于C組，除血清NO含量在N組與C組之間的差異沒有統(tǒng)計學意義(P=0.446)之外，灌藥組均較正常對照組明顯升高。 3 不同時間灌服纈沙坦后，大鼠心肌組織eNOS-mRNA表達量的平均水平，方差分析顯示：M組和N組高于C組，但是三組之間的差別均沒有統(tǒng)計學差異，在各個時點的表達量的平均水平的差別也無統(tǒng)計學差

9、異(P>0.05)。 4 不同時間灌服纈沙坦后，鼠尾收縮壓晝夜平均水平：M組和N組低于C組，且三組之間的差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 5 余弦擬合分析及零振幅檢驗顯示，C組、M組、N組大鼠血漿ET-1，血清NO、eNOS，心肌組織中ET-1、NO、eNOS、eNOS-mRNA及血壓檢測值均呈現(xiàn)出典型的近日節(jié)律性。C組血漿ET-1，血清NO、eNOS的峰值依次出現(xiàn)于22：33、9：07、10：54，M組的峰值提前出

10、現(xiàn)，三者的峰值時刻依次為18：23、4：49、4：27，N組三者峰值時刻依次為21：14、4：40、2：45。血清NO、eNOS及心肌組織eNOS-mRNA在M組和N組余弦曲線的振幅均較C組的振幅增高，血漿ET-1振幅降低，提示灌藥組大鼠的血清NO、eNOS的整體水平較正常對照組增高，而ET-1則降低。心肌組織中ET-1、NO、eNOS、eNOS-mRNA的余弦擬合曲線的節(jié)律的峰值時刻及振幅水平與血清的趨勢基本一致，C組心肌組織ET-1

11、、NO、eNOS的峰值依次出現(xiàn)于12：14、8：23、11：27，M組的峰值提前出現(xiàn)，三者的峰值時刻依次為10：11、2：14、3：21，N組三者峰值時刻依次為16：29、3：46、3：29。 6 余弦擬合分析及零振幅檢驗顯示，C組、M組、N組大鼠心肌組織中eNOS-mRNA呈現(xiàn)出典型的近日節(jié)律性。C組、M組、N組大鼠心肌組織中eNOS-mRNA的峰值分別出現(xiàn)于15：37、20：38、20：36。M組、N組的振幅明顯高于C組。

12、7 余弦擬合分析及零幅檢驗顯示，C組、M組、N組大鼠血壓均呈現(xiàn)出典型的近日節(jié)律性，三者峰值時刻依次為23：26、10：27、17：00。M組振幅較C組的升高，而N組則較C組降低。 結論： 1.未灌藥的大鼠血漿、心肌組織中ET-1、NO、eNOS的表達量存在典型的晝夜節(jié)律特征，心肌組織中eNOS-mRNA的表達也呈現(xiàn)明顯晝夜節(jié)律。 2.不同時間灌服纈沙坦后，大鼠血漿、心肌組織中ET-1含量明顯降低，NO、eNOS及

13、心肌組織中eNOS-mRNA含量明顯升高，并且晝夜節(jié)律特征更加明顯。 3.早晨灌服纈沙坦較夜間灌服，更能增加NO、eNOS、eNOS-mRNA的表達量，降低血壓平均水平及ET-1的表達，并且能更好的恢復其晝夜節(jié)律性。上述結果表明，大鼠血及心肌組織內ET-1、NO、eNOS的表達量及心肌組織eNOS-mRNA的表達水平均具有典型的晝夜節(jié)律特征，且各指標之節(jié)律特征相似。纈沙坦早晚不同時間喂藥影響大鼠各測量值的近日節(jié)律，早晨喂藥比晚上