不同時(shí)間灌服培哚普利對(duì)高血壓大鼠尿RAAS活性物質(zhì)晝夜節(jié)律的影響.pdf

1、目的：生物節(jié)律是自然界的普遍現(xiàn)象。根據(jù)節(jié)律的周期可分為三種類型：近日節(jié)律(circadian rhythm,或晝夜節(jié)律, diurnal rhythm)，節(jié)律周期接近24小時(shí)；超日節(jié)律(ultradian rhythm)，指周期短于24小時(shí)的生物節(jié)律，變動(dòng)頻率超過每日一次；亞日節(jié)律(infradian rhythm)，周期長(zhǎng)于24小時(shí)的生物節(jié)律。其中以晝夜節(jié)律在人類及動(dòng)物中研究最為普遍。研究發(fā)現(xiàn)，人類血壓特征表現(xiàn)為典型的晝夜節(jié)律，血壓生

2、物節(jié)律異常導(dǎo)致心臟、血管、腦、腎等重要臟器的損害增加，同時(shí)心腦血管事件的發(fā)生率和死亡率也增加。多種因素影響血壓晝夜節(jié)律的形成和維持，其中腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)發(fā)揮了重要作用。RAAS是調(diào)節(jié)人體血壓、維持水電解質(zhì)平衡，保持機(jī)體內(nèi)環(huán)境恒定的重要系統(tǒng)。近年來研究發(fā)現(xiàn)，局部組織RAAS，尤其是腎臟組織RAAS在高血壓的發(fā)生及發(fā)展中起到重要作用。動(dòng)物試驗(yàn)提示，尿液中血管緊張素原(AGT)水平與腎組織內(nèi)AGT、血管緊張素Ⅱ(Ang

3、Ⅱ)活性呈正相關(guān),可能是反映腎內(nèi)RAAS活性的重要指標(biāo)。本研究以自發(fā)性高血壓大鼠(Spontaneously hypertensive rat, SHR)為研究對(duì)象，通過收集不同時(shí)間(6:00,12:00,18:00,24:00) SHR大鼠尿液，探討SHR大鼠尿液中AGT、AngⅡ、腎素、醛固酮等活性物質(zhì)的時(shí)間生物學(xué)特征，并比較不同時(shí)間(早上和晚上)灌服培哚普利對(duì)其活性物質(zhì)水平及晝夜節(jié)律的影響。
　　方法：10周齡雄性SHR大鼠

4、30只，體質(zhì)量為250-300克，飼養(yǎng)于河北省人民醫(yī)院動(dòng)物中心。將SHR大鼠隨機(jī)分為三組，每組10只，分別為早晨07:00灌藥組(M)、晚上07:00灌藥組(N)、高血壓空白對(duì)照組(C)。M組、N組每日給予培哚普利2mg/Kg灌服，C組給予等體積生理鹽水灌服。實(shí)驗(yàn)前對(duì)大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，待其代謝穩(wěn)定及適應(yīng)周圍環(huán)境后，用鼠尾血壓計(jì)每4周測(cè)量各組大鼠收縮壓(Systolic blood pressure, SBP)。按上述方案飼養(yǎng)8周后，測(cè)

5、量各組SHR大鼠體質(zhì)量，用鼠尾血壓計(jì)再次測(cè)量各組大鼠收縮壓，并于同日24小時(shí)內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)(6:00,12:00,18:00,24:00)收集各組SHR大鼠尿液，采用ELISA法(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)分別檢測(cè)檢測(cè)大鼠尿液中AGT、AngⅡ、腎素、醛固酮的含量。之后處死各組大鼠，取大鼠心臟，去除大血管殘留，用濾紙吸干后稱取全心重量及左心室重量(Left ventricular w

6、eight, LVW)，計(jì)算心重指數(shù)(Heart weight index, HWI)，并留取心臟病理組織顯微鏡下進(jìn)行觀察。應(yīng)用余弦擬合法分析3組SHR大鼠尿液中各指標(biāo)含量的時(shí)間生物學(xué)特征，采用零振幅檢驗(yàn)(zero amplitude test)評(píng)價(jià)各指標(biāo)的近日節(jié)律是否存在，應(yīng)用方差分析比較各組之間是否具有差異性，當(dāng)P<0.05時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：⑴方差分析顯示，尿液中腎素的晝夜平均水平：M組和N組高于C組并有統(tǒng)計(jì)學(xué)

7、意義(P<0.01)，而M組和N組之間無明顯差異(P=0.265)；尿液中AGT、AngⅡ、醛固酮的晝夜平均水平：M組和N組低于C組，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，而M組和N組之間無明顯差異(P=0.265, P=0.07, P=0.127)。⑵方差分析顯示，實(shí)驗(yàn)前各組大鼠收縮壓水平無差異(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)8周后，方差分析顯示，M組和N組SHR大鼠收縮壓均低于C組(P<0.01)，而收縮壓在M組和N組間無顯著性差異(P=0.751

8、)。⑶方差分析顯示，M組和N組SHR大鼠左心室重量、心重指數(shù)低于C組(P<0.01)，而M組和N組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.510, P=0.497)。SHR空白對(duì)照組心肌病理組織可見心肌纖維胞質(zhì)濃染，排列疏松，不規(guī)則，間質(zhì)成纖維細(xì)胞沉積，膠原纖維增生、變粗；早、晚灌藥組大鼠與SHR空白對(duì)照組比較可見心肌纖維化程度減輕，心肌細(xì)胞排列較規(guī)則。⑷余弦擬合分析及零振幅檢驗(yàn)顯示，三組SHR大鼠尿液中AGT、AngⅡ、腎素及醛固酮濃度均表現(xiàn)典型

9、的晝夜節(jié)律。C組大鼠尿液中AGT、AngⅡ、腎素、醛固酮峰值依次出現(xiàn)在1:11、5:18、7:57、0:51，M組四者的峰值分別出現(xiàn)在12:13、7:46、17:23、4:30，N組四者的峰值分別出現(xiàn)在14:40、11:45、13:27、7:01，M組、N組各觀察指標(biāo)峰值出現(xiàn)時(shí)間較對(duì)照組延后，且N組落后于M組相應(yīng)時(shí)間。
　　結(jié)論：①早晚不同時(shí)間灌服培哚普利，SHR大鼠尿液中AGT、AngⅡ、醛固酮晝夜平均水平低于對(duì)照組，腎素晝夜平

10、均水平高于對(duì)照組。②三組SHR大鼠尿液中AGT、AngⅡ、腎素、醛固酮濃度具有明顯的晝夜節(jié)律。早晚灌服培哚普利在一定程度上可以影響上述指標(biāo)(主要表現(xiàn)在節(jié)律峰值提前)，早晨較晚間灌藥可使RAAS各組分的節(jié)律峰值提前。提示不同時(shí)間灌服培哚普利可以影響尿液中RAAS各組分的時(shí)間生物學(xué)特征。③早晚不同時(shí)間灌服培哚普利均可以降低SHR大鼠收縮壓，早、晚喂藥對(duì)收縮壓影響無明顯差別。④早晚不同時(shí)間灌服培哚普利均可以降低SHR大鼠左心室重量及心重指數(shù)，