左旋咪唑?qū)AE大鼠血腦屏障及MCP-1、MIP-1α、MMP-2、ICAM-1變化的影響.pdf

1、背景:20世紀(jì)80年代以來,國內(nèi)外陸續(xù)報(bào)道了"左旋咪唑(LMS)與原因不明炎性脫髓鞘腦病".多項(xiàng)目藥物流行病學(xué)調(diào)查已證實(shí)LMS能引起炎性脫髓鞘性白質(zhì)腦病.實(shí)驗(yàn)研究也發(fā)現(xiàn)LMS對(duì)實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎(EAE)的免疫反應(yīng)具有明顯促發(fā)加重作用. 目的：觀察左旋咪唑(LMS)不同階段給藥對(duì)實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎(EAE)大鼠血腦屏障(BBB)以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)內(nèi)MCP-1、MIP-1 α、MMP-2和ICAM-1表達(dá)的影響

2、,為闡述LMS性白質(zhì)腦病的發(fā)病機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù). 方法：雌性wistar大鼠45只分成5組:CFA對(duì)照組、模型(EAE)組、LMS免疫前給藥組(LMS1)、LMS免疫同時(shí)給藥組(LMS2)、LMS免疫后間斷給藥組(LMS3).通過四足墊皮下注射豚鼠脊髓勻漿-完全弗氏佐劑(GPSCH-CFA)抗原乳劑免疫大鼠建立EAE模型,LMS1于免疫前給LMS(10mg/kg,ip,bid×7d),LMS2于免疫第Oh、24h、48h給LMS

3、(10mg/kg,ip,qd×3d),LMS3于免疫后每隔11天分別給LMS(10mg/kg,ip,qd×3d),共計(jì)6次.CFA對(duì)照組和EAE組腹腔注射生理鹽水(NS)代替.免疫當(dāng)日定為第0天,每日觀察并記錄動(dòng)物行為學(xué)及體重的變化.各組動(dòng)物于發(fā)病高峰期處死(CFA對(duì)照組的半數(shù)動(dòng)物及LMS3組于復(fù)發(fā)高峰期處死),取腦和脊髓,用多聚甲醛固定,行HE染色和Kluver&Barrera髓鞘染色.免疫組化法(SABC法)測(cè)定GFAP、IgG、M

4、CP-1、MIP-1 α的表達(dá);原位雜交法測(cè)定表達(dá)MCP-1、MMP-2、ICAM-1 mRNA的細(xì)胞數(shù)量. 結(jié)果：(1)行為學(xué)觀察:EAE組大鼠最早發(fā)病于免疫后第13天(13dpi),潛伏期為13.67±1.15dpi,表現(xiàn)為活動(dòng)減少、進(jìn)食減少、體重減輕,先出現(xiàn)尾張力降低、尾巴拖地不能抬起,繼而后肢無力、步態(tài)異常、癱瘓.LMS1、LS2組潛伏期分別為14.40±2.07dpi和14.00±1.19dpi,與EAE組比較無顯著差

5、異.14dpi時(shí),LMS1、LMS2組的臨床癥狀評(píng)分平均值(2.50±0.71,2.00±0.00)較EAE組(1.00±0.00)明顯增高(P<0.01,P<0.05).LMS1組最大癥狀評(píng)分平均值(3.80±0.45)較EAE組增高(P<0.05).LMS2組的發(fā)病率(8/9)較EAE組(3/8)增高(P<0.05).L,MS3組大鼠發(fā)病于14.00±1.37dpi,且2/10大鼠于24.00±1.41dpi出現(xiàn)復(fù)發(fā).CFA對(duì)照組大

6、鼠于第14天雖然出現(xiàn)佐劑性關(guān)節(jié)炎癥狀,雙后肢腫脹、步履蹣跚癥狀,但是未見尾巴無力、下垂、麻痹和后肢無力、麻痹等神經(jīng)系統(tǒng)受損的表現(xiàn).(2)病理學(xué)改變:EAE組CNS內(nèi)可見不同程度的炎性細(xì)胞浸潤,腦干和脊髓處最為明顯,主要表現(xiàn)為血管套形成,噬神經(jīng)現(xiàn)象:神經(jīng)細(xì)胞腫脹、變性、壞死.Kluver&Barrera髓鞘染色發(fā)現(xiàn),廣泛的神經(jīng)髓鞘變性、脫失,以腦干、脊髓和小腦等為著,但軸突相對(duì)完整.LMS1及LMS2組大鼠CNS炎性浸潤和脫髓鞘呈加重趨勢(shì)

7、.LMS3組于復(fù)發(fā)期出現(xiàn)炎癥浸潤及脫髓鞘改變.CFA對(duì)照組大鼠均未觀察到炎性細(xì)胞浸潤和髓鞘脫失.(3)免疫組化結(jié)果:與CFA對(duì)照組相比,EAE組大鼠CNS內(nèi)GFAP和IgG表達(dá)明顯增加.與EAE組相比,LMS1及LMS2組GFAP和IgG表達(dá)明顯增加;于復(fù)發(fā)期,LMS3組可見GFAP和IgG的表達(dá).和CFA對(duì)照組相比,EAE組大鼠CNS內(nèi)的MCP-1、MIP-1 α表達(dá)量升高.和EAE組相比,在發(fā)病高峰期,LMS1,LMS2組大鼠CNS

8、內(nèi)MCP-1的表達(dá)量明顯升高(P<0.01):LMS1組大鼠腦干MIP-1α明顯升高(P<0.01),LMS1、LMS2組大鼠腰髓MIP-1α升高(P<0.05).在復(fù)發(fā)期,LMS3組大鼠CNS內(nèi)MCP-1、MIP-1α的表達(dá).(4)原位雜交結(jié)果:與CFA對(duì)照組比較,EAE組大鼠CNS內(nèi)表達(dá)MCP-1、MMP-2、ICAM-1mRNA陽性細(xì)胞數(shù)目增加,且以大腦皮層及腦干表達(dá)明顯.與EAE組比較,LMS1、LMS2組大鼠大腦內(nèi)表達(dá)MCP-

9、1、MMP-2、ICAM-1mRNA陽性細(xì)胞染色數(shù)目增加(P<0.01).LMS3組于復(fù)發(fā)期可見MCP-1、MIdP-2、ICAM-1mRNA陽性細(xì)胞的表達(dá). 結(jié)論：(1)L.MS免疫前給藥能加重Wistar大鼠EAE臨床癥狀,加速病情進(jìn)展,加重炎癥浸潤及髓鞘脫失. LMS免疫同時(shí)給藥能增加Wistar大鼠EAE的發(fā)病率,且加重臨床癥狀,加速病情進(jìn)展,加重炎癥浸潤及髓鞘脫失. LMS免疫后階段給藥可導(dǎo)致Wista