2BFI對EAE小鼠膠質(zhì)細(xì)胞及MCP-1、MMP-9、ICAM-1變化的影響.pdf

1、目的： 觀察咪唑啉2受體配體2BFI對實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎(EAE)小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)內(nèi)膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)和MCP-1、MMP-9、ICAM-1表達(dá)的影響，探索咪唑啉受體與ERE之間的關(guān)系以及不同的作用途徑。 方法： 將雌性C57BL/6小鼠40只隨機(jī)分為5組：空白對照組(CFA-saline)，模型對照組(ERE-saline)，2BFI干預(yù)組(EAE-2BFI)包括：EAE+2BFI5 mg·kg-1組

2、(EAE-2BFI5)、EAE+2BFI10 mg·kg-1組(EAE-2BFI10)和EAE+2BFI20mg·kg-1組(EAE-2BFI20)。模型對照組：用MOG免疫C57BL/6小鼠制作EAE模型；2BFI干預(yù)組：造模方法同模型對照組，并且EAE-2BFI5組、EAE-2BFI10組、EAE-2BFI20組分別于免疫當(dāng)天開始注射2BFI5 mg·kg-1、10mg·kg-1、20 mg·kg-1，每天兩次腹腔注射給藥，連續(xù)14

3、天；CFA-saline組：用等量CFA替代MOG免疫小鼠。EAE-saline組和CFA-saline組用等量生理鹽水(NS)替換2BFI腹腔注射給藥，所有動物的給藥方式、程序相同。免疫當(dāng)日定為第0天，每日觀察并記錄動物行為學(xué)及體重的變化。各組動物在ERE模型對照組發(fā)病高峰期處死(18-20天)，取腦和脊髓，用多聚甲醛固定，行HE染色。通過免疫組化法(SABC法和SP法)測定GFAP、Iba-1、MCP-1、MMP-9的表達(dá)；RT-P

4、CR法測定MMP-9、ICAM-1 mRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果： (1)行為學(xué)觀察：EAE-saline組小鼠最早發(fā)病于免疫后第13天(13dpi)，潛伏期為(14.2±1.17)dpi，表現(xiàn)為活動減少、進(jìn)食減少、體重減輕，先出現(xiàn)尾巴張力降低、尾巴拖地不能抬起，繼而步態(tài)異常、后肢無力、癱瘓。各觀察組動物ERE誘發(fā)率分別為CFA-saline組(0/8)，ERE-saline組(6/8)，EAE-2BFI5組(4/8)，E

5、AE-2BFI10組(2/8)，ERE-2BFI20組(2/8)，顯示2BFI干預(yù)后EAE誘發(fā)率呈下降趨勢，但統(tǒng)計(jì)學(xué)比較無顯著差異，可能與計(jì)數(shù)資料的樣本量過少影響統(tǒng)計(jì)的效度與信度有關(guān)。EAE-2BFI5組、ERE-2BFI10組、EAE-2BFI20組潛伏期分別為(14.8±1.89、14.5±0.35、15.00±0.00)dpi，與EAE-saline組比較均無顯著差異。ERE-2BFI5組、ERE-2BFI10組、EAE-2BFI

6、20組的最大臨床癥狀評分平均值(2.3±2.49、0.9±1.64、0.5±0.93)較EAE-saline組(4.0±2.63)明顯降低(P<0.05、P<0.01和P<0.01)。CFA-saline組小鼠未見神經(jīng)功能受損癥狀。 (2)病理學(xué)改變：EAE組腦脊髓內(nèi)可見大量的炎性病灶，病灶處小血管管周有大量的炎性細(xì)胞浸潤，成“袖套”樣改變，伴有脊膜增厚。從形態(tài)學(xué)上看浸潤的炎性細(xì)胞以淋巴細(xì)胞為主，可見一定量的巨噬細(xì)胞。EAE-2

7、BFI干預(yù)組小鼠腦脊髓炎性浸潤明顯減少。EAE-2BFI5組、EAE-2BFI10組、EAE-2BFI20組病理評分分別為(1.1±1.24、0.625±1.19、0.625±1.19)較EAE-saline組(2.5±1.69)明顯減少(P<0.05、P<0.01和P<0.01)。CFA-saline組小鼠未觀察到炎性細(xì)胞浸潤。 (3)免疫組化結(jié)果：與CFA-saline組相比，EAE-saline組小鼠CNS內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)

8、目和小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目均明顯增加。與EAE-saline組相比，EAE-2BFI干預(yù)組CNS內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞增多而小膠質(zhì)細(xì)胞明顯減少。CFA-saline組小鼠CNS內(nèi)MCP-1無明顯表達(dá)，EAE-saline組小鼠CNS內(nèi)的MCP-1表達(dá)升高。EAE-2BFI干預(yù)組小鼠CNS內(nèi)MCP-1的表達(dá)較EAE-saline組明顯減少(P<0.01)。EAE-saline組小鼠大腦內(nèi)的MMP-9表達(dá)升高，EAE-2BFI干預(yù)組小鼠大腦內(nèi)MMP-9的表

9、達(dá)較EAE-saline組明顯減少(P<0.01)。CFA-saline組小鼠大腦MMP-9無明顯表達(dá)。 (4)RT-PCR結(jié)果：與CFA-saline組比較，EAE-saline組小鼠CNS內(nèi)MMP-9、ICAM-1mRNA表達(dá)水平明顯增加，與EAE-saline組比較，EAE-2BFI干預(yù)組小鼠CNS內(nèi)MMP-9、ICAM-1mRNA表達(dá)水平降低，統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著差異。其中EAE-2BFI10組和EAE-2BFI20兩組對兩種因

10、子的表達(dá)水平降低作用更為明顯(P<0.01)。 結(jié)論： (1)2BFI干預(yù)對小鼠EAE具有保護(hù)作用，EAE發(fā)病率呈降低趨勢，2BFI減輕了EAE臨床癥狀和病理損傷程度，其有效劑量在5-20 mg·kg-1之間。 (2)2BFI對EAE小鼠CNS中的星形膠質(zhì)細(xì)胞有增殖活化作用，同時(shí)抑制了小膠質(zhì)細(xì)胞的增殖活化，從而減輕EAE的CNS炎癥細(xì)胞反應(yīng)。 (3)2BFI可能對MCP-1、MMP-9和ICAM-1有調(diào)節(jié)