雷公藤內酯醇抑制人神經膠質母細胞U87細胞增殖和侵襲的作用及機制.pdf

1、目的:
　　惡性神經膠質瘤是顱內惡性程度最高的腫瘤，具有浸潤侵襲性生長的特性，手術難以完全切除，且易于復發(fā)，患者如果不接受治療平均生存期僅幾個月。目前臨床上對神經膠質瘤采取手術、放療、化療、免疫等手段進行綜合治療，但患者預后不佳。侵襲是神經膠質瘤的標志性惡性生物學特性，也是神經膠質瘤預后差的重要原因。
　　神經膠質瘤的侵襲受到多機制的調控，其中核因子κB（NF-κB）家族中P65的表達與神經膠質瘤的侵襲性具有顯著相關性，激活

2、NF-κB可促進CB和MMP-9轉錄，增強水解細胞外基質能力促進侵襲進程。因此NF-κB可以為抑制神經膠質的侵襲提供一個作用靶點。
　　雷公藤內酯醇(triptolide)是從傳統(tǒng)中草藥中提取得單體化合物，臨床上常作為免疫抑制劑治療免疫系統(tǒng)疾病。近來研究發(fā)現(xiàn)雷公藤內酯醇對神經膠質瘤細胞具有抑制增殖、誘導凋亡的作用，但是對其是否具有抑制侵襲的作用還不得而知。
　　本研究擬對triptolide處理過的神經膠質瘤細胞株U87進行

3、檢測，觀察triptolide對U87細胞的增殖及侵襲能力的影響，并進一步研究triptolide抗侵襲作用的可能機制，初步探討NF-κB信號通路與triptolide抗神經膠質瘤作用的關系，為將來把triptolide開發(fā)成為抗神經膠質瘤的藥物提供理論基礎。
　　方法:
　　1.通過甲基偶氮唑藍比色法(MTT)測定雷公藤內酯醇處理后U87細胞增殖抑制率;
　　2.劃痕實驗和體外transwell小室模型檢測雷公藤內酯

4、醇對U87細胞遷移能力和侵襲能力的影響;
　　3.Real-Time PCR分別檢測雷公藤內酯醇對U87細胞的組織蛋白酶B（Cathepsins B CB）、基質金屬蛋白酶9(MMP-9)的mRNA轉錄水平的影響;
　　4.蛋白印跡法檢測雷公藤內酯醇對U87膠質瘤細胞的CB、MMP-9和p65蛋白活性的影響。
　　結果:
　　1、在U87細胞上雷公藤內酯醇以劑量-效應方式抑制膠質瘤細胞增殖，其IC50值是25.3

5、6μg·L-1。
　　2、雷公藤內酯醇可減弱U87膠質瘤細胞的遷移和侵襲能力，劃痕實驗:72h后對照組遷移細胞數(shù)45±3個，且細胞形態(tài)無改變，生長良好。雷公藤內酯醇組72 h遷移細胞數(shù)11±2個細胞偽足變短，活力下降。Transwell侵襲實驗:遷移穿過基質膠與濾膜侵襲入下室的U87細胞數(shù)為:對照組平均102.5±3.0個，雷公藤內酯醇組平均55.4±2.7個，雷公藤內酯醇作用后U87膠質瘤細胞的侵襲能力顯著下降(P＜0.05)，

6、有顯著性差異。
　　3、RealTime PCR:藤內酯醇處理24 h后惡性膠質瘤U87膠質瘤細胞的CB、MMP-9基因的mRNA的表達較空白對照組均明顯下降。CB和MMP-9的轉錄明顯受到抑制，Cathepsins B基因和MMP-9基因的2-ΔΔCT值分別是0.64和0.28(P＜0.05)
　　4、蛋白印跡法:24h后空白對照組相比雷公藤內酯醇組的p65蛋白活性明顯被抑制，同時MMP-9、CB的蛋白水平也明顯下降。