肌萎縮側(cè)索硬化患者血清和腦脊液中胰島素樣生長(zhǎng)因子-1的研究.pdf

1、目的：肌萎縮側(cè)索硬化(amyotrophic lateral sclerosis，ALS)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)常見的一種慢性進(jìn)行性變性疾病，以腦和脊髓中選擇性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元變性為特征，臨床表現(xiàn)為緩慢起病，進(jìn)行性發(fā)展，逐漸出現(xiàn)四肢肌肉的無(wú)力、萎縮，并有錐體束征等。ALS是一種致死性疾病，患者多在首次出現(xiàn)癥狀后的3-5年內(nèi)死于呼吸衰竭。根據(jù)其發(fā)病和遺傳特點(diǎn)可分為家族型肌萎縮側(cè)索硬化(FamilialAmyotrophic Lateral Sclero

2、sis，F(xiàn)ALS)和散發(fā)型肌萎縮側(cè)索硬化(Sporadic Amyotrophic Lateral Sclerosis，SALS)，其中FALS不足10％，而SALS則占整體ALS的90％以上。FALS主要是由于編碼Cu/Zn超氧化物歧化酶(SOD1)基因突變引起，其突變位點(diǎn)在21號(hào)染色體長(zhǎng)臂Cu/Zn SOD基因內(nèi)，即21q22.1-22.2。SALS目前病因不清，其發(fā)病機(jī)制可能主要集中在以下幾個(gè)方面：①谷氨酸的興奮毒作用和鈣離子超載

3、；②自由基的毒性作用；③自身免疫機(jī)制；④線粒體功能異常；⑤神經(jīng)絲的過(guò)度磷酸化；⑥神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子缺乏等。 胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(Insulin-like Growth Factor-1，IGF-1)是一種作用于多個(gè)組織和器官的多向性蛋白質(zhì)。它已經(jīng)被用于多個(gè)疾病的治療，包括生長(zhǎng)發(fā)育不良、骨質(zhì)疏松癥、分解代謝紊亂癥和糖尿病。最近的證據(jù)支持IGF-1具有保持神經(jīng)系統(tǒng)整體性和同質(zhì)性的作用。臨床試驗(yàn)顯示IGF-1具有臨床應(yīng)有的可能，特別在神

4、經(jīng)系統(tǒng)變性疾病方面。離體實(shí)驗(yàn)和在體實(shí)驗(yàn)均表明IGF-1具有促進(jìn)神經(jīng)元生存和強(qiáng)大促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)再生作用．多中心正在進(jìn)行IGF-1治療ALS病人的臨床試驗(yàn)。但人們對(duì)ALS患者血清、腦脊液中IGF-1的含量了解較少。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖菧y(cè)量ALS患者血清和腦脊液IGF-1含量。 方法： 1 患者患者均為就診于河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科的病人，該實(shí)驗(yàn)征得患者同意和得到醫(yī)院倫理委員支持。ALS患者是根據(jù)E1 Escorial標(biāo)準(zhǔn)確診或擬

5、診的ALS患者。診斷ALS需要滿足以下條件：(1)下運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元受損的癥狀和體癥，包括臨床表現(xiàn)正常，肌肉電生理和神經(jīng)病理異常； (2)上運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元病損特征；(3)一個(gè)或兩個(gè)部位的病情逐漸進(jìn)展。診斷ALS不能出現(xiàn)以下情況：(1)其他疾病的電生理證據(jù)能夠解釋的上和/或下運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元受損的特征； (2)其他疾病的神經(jīng)影象能夠解釋觀察到臨床癥狀和電生理特征。確診ALS需要有球部和兩處脊髓的上下運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元同時(shí)受損的臨床癥狀和體征。擬診ALS需要至少兩

6、個(gè)部位上下運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元同時(shí)受損的臨床癥狀和體征。疾病對(duì)照的20名患者進(jìn)行腰穿是由于懷疑感染性疾病但最后證實(shí)為緊張性頭疼、偏頭疼、癲癇。健康對(duì)照18人為進(jìn)行健康體檢抽血檢查并證實(shí)沒有疾病。 2 樣品的收集血清樣品留取經(jīng)抽取靜脈血，靜置后離心，取上清，分裝成小份放-80℃保存，有溶血的標(biāo)本淘汰。CSF樣品留取經(jīng)腰穿，迅速離心，分裝成小份放-80℃保存，有紅細(xì)胞的標(biāo)本淘汰。 3 IGF-1的檢測(cè)IGF-1的檢測(cè)采用酶連免疫吸

7、附法(ELISA)試劑盒，實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照產(chǎn)品說(shuō)明進(jìn)行。IGF-1 ELISA采用二步擴(kuò)大三明治型免疫測(cè)量法。96孔板預(yù)先用抗IGF-1抗體包被。再測(cè)量過(guò)程中，標(biāo)準(zhǔn)品、控制品和預(yù)處理的待測(cè)樣品加入96孔板，經(jīng)孵育洗板后，加入另一種標(biāo)記有辣根過(guò)氧化物酶的抗IGF-1抗體，再孵育洗板后，每孔加入TMB顯色劑，孵育后用稀硫酸終止液終止。然后用光譜光密度檢測(cè)儀在450nm和620nm波長(zhǎng)條件下測(cè)量每孔吸光值，每孔吸光值大小與該孔所加樣品中的IGF-

8、1含量成正比。 4 統(tǒng)計(jì)分析 結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差來(lái)表示。用t檢驗(yàn)分析正常組與ALS組血清中IGF-1濃度、疾病對(duì)照組與ALS組CSF中IGF-1濃度。CSF中與血清中IGF-1相關(guān)性分析應(yīng)用Pearson相關(guān)系數(shù)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。 結(jié)果： 1.ALS患者血清中IGF-1的濃度為158.06±71.02ng/mL，健康對(duì)照組血清中IGF-1的濃度為143.90±37.09ng/mL，兩組間血清中

9、IGF-1的濃度無(wú)顯著差異(P=0.4601)。 2．ALS患者CSF中IGF-1的濃度為26.62±2.60ng/mL，疾病對(duì)照組CSF中IGF-1的濃度為27.24±1.92ng/mL，兩組間CSF中IGF-1的濃度無(wú)顯著差異(P=0.4018)。 3．ALS患者血清中IGF-1濃度CSF中IGF-1濃度無(wú)相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)r=-0．2089,P=0.4055。 結(jié)論：ALS患者血清中和CSF中IGF-1濃度沒