2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、新生血管性疾病(Neovascularization,NV)是當(dāng)今很多眼科疾病導(dǎo)致視力災(zāi)難性喪失甚至致盲的主要原因。在正常視網(wǎng)膜血管的發(fā)育過程中,血管內(nèi)皮細(xì)胞(Vascular endothelial cell,VEC)在各種細(xì)胞因子作用下增殖并通過細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix,ECM)進(jìn)行遷移有序的形成血管。而在病理性NV形成過程中,在眼的相關(guān)部位如虹膜、視網(wǎng)膜、及脈絡(luò)膜可形成無序的,異常形態(tài)結(jié)構(gòu)及無功能的血管

2、形成。這些新生的血管很容易發(fā)生滲漏、出血、進(jìn)而引起視網(wǎng)膜水腫、纖維增生、視網(wǎng)膜玻璃體出血或牽引性視網(wǎng)膜脫離可以導(dǎo)致潛在的災(zāi)難性的視力喪失。
   本研究中,我們嘗試探討運用內(nèi)源性血管抑制因子來治療和抑制眼底NV并簡要的討論眼底NV的發(fā)生機制。我們著重研究了內(nèi)源性血管生長抑制因子對于眼底NV的作用機制。內(nèi)源性血管抑制因子,是一組機體自身存在的抑制血管生成的負(fù)反饋分子,對機體正常生理作用的干預(yù)和影響小。在研究中我們發(fā)明了一種新的免疫

3、染色方法可以高質(zhì)量定性和定量的評價視網(wǎng)膜新生血管(Retinal neovascularization,RNV)以及脈絡(luò)膜新生血管(Choroidal neovascularization,CNV)。本研究提供了幾種眼底NV可行的新型治療靶點,不僅可以作為有價值的研究工具,并且可能具備潛在的治療前景。
   1、One Click Staining一種特殊的新生血管特異性免疫組織化學(xué)染色以用于研究新生血管和巨噬細(xì)胞關(guān)系研究

4、>   目的:本研究的日的是研究和探索新的染色方法以提高及規(guī)范化視網(wǎng)膜血管和新生血管(NV)的染色,對新生血管更準(zhǔn)確的進(jìn)行定性定量分析。
   方法:對缺氧誘導(dǎo)新生血管的小鼠,在出生后17天,對其視網(wǎng)膜表面產(chǎn)生的新生血管進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,分別運用了熒光標(biāo)記的GSA lectin抗體和沒有熒光標(biāo)記的抗體和不同長度的染色時間。與此同時,在缺氧誘導(dǎo)新生血管模型小鼠出生后的第13,15,17,19,21,23,25天進(jìn)行全視網(wǎng)膜新

5、生血管和巨噬細(xì)胞的體外染色,鋪片拍照以觀察新生血管和巨噬細(xì)胞的關(guān)系。同時對出生后21天rho/VEGF轉(zhuǎn)基因小鼠采用同樣體外染色方法,可以特異性地染色視網(wǎng)膜下血管。
   結(jié)果:對缺氧誘導(dǎo)的小鼠新生血管模型(ROP模型)視網(wǎng)膜新生血管在用GSA標(biāo)記的Lectin抗體染色40分鐘后,可以觀察到清晰的新生血管的細(xì)微結(jié)構(gòu)包括新生血管前端的絲狀足突,并且視網(wǎng)膜原有的結(jié)構(gòu)血管沒有或者僅有少量背景顏色,非常利于使用圖像分析軟件來定性和定量的

6、評價新生血管。當(dāng)以GSA標(biāo)記的Lectin抗體和抗F4/80的抗體或者抗iNOS的抗體進(jìn)行視網(wǎng)膜雙重染色,結(jié)果發(fā)現(xiàn)iNOS在生長和退行過程中新生血管高表達(dá),而在視網(wǎng)膜的其他部位則未見明顯表達(dá)。而且可以顯示巨噬細(xì)胞與新生血管的相關(guān)位置,進(jìn)而揭示巨噬細(xì)胞和新生血管以及新生血管退化之間的關(guān)系。對缺氧誘導(dǎo)的小鼠新生血管模型,在不同的時點P13,P15,P17,P19,P21,P23以及P25天,運用這種染色方法觀察到視網(wǎng)膜表面新生血管以及巨噬細(xì)

7、胞分布,數(shù)量的明顯變化。運用這種方法染色轉(zhuǎn)基因RhoNEGF小鼠同樣可以特異的染色出其視網(wǎng)膜下生長的新生血管。
   結(jié)論:本研究描述的體外染色技術(shù)可以準(zhǔn)確特異性地染色出新生血管。通過運用這種方法,視網(wǎng)膜新生血管的特異結(jié)構(gòu),得到了很好的染色顯示。聯(lián)合其他的抗體雙染視網(wǎng)膜新生血管,進(jìn)一步揭示了新生血管和各種其他炎性因子iNOS,以及巨噬細(xì)胞的相互關(guān)系。并且提供了簡單的方法對巨噬細(xì)胞進(jìn)行定義和精確計數(shù),實驗結(jié)果顯示巨噬細(xì)胞和iNOS

8、可能與眼內(nèi)血管的形成和消退緊密相關(guān)。
   2、內(nèi)源性血管抑制因子rhEDI-8t抑制RNV和CNV
   目的:本研究中,我們研究了重組血管內(nèi)皮抑制因子rhEDI-8t,一種從來自膠原Ⅷ的內(nèi)源性蛋白質(zhì),研究其對于在病理狀態(tài)下產(chǎn)生的RNV、CNV的抑制作用。
   方法:為了研究重組內(nèi)源性血管生長抑制因子rhEDI-8t對于新生血管的抑制作用,實驗分為體外實驗和體內(nèi)實驗兩大部分,在體外細(xì)胞學(xué)實驗中我們通過培養(yǎng)人類

9、臍血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC),觀察血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖情況的增殖試驗,和牛主動脈內(nèi)皮細(xì)胞(BAEC)遷移能力的遷移實驗。為了驗證rhEDI-8t在眼新生血管上是否有抑制作用作用。我們進(jìn)一步分別運用了三種不同機制的眼新生血管動物模型,包括了激光誘導(dǎo)的脈絡(luò)膜新生血管(Choroidal neovascularization CNV)的小鼠動物模型,5-6周大的C57BL/6雌性小鼠按照隨機數(shù)字法隨機雙盲分為四組。對照組和只療組分別予右眼眼內(nèi)注入

10、1μlPBS,或者1,2,5μg of rhEDI-8t(n=49,51,33,35;每個激光斑n=1)。第二天,使用激光光凝的方法在三個象限破壞小鼠的Bruch,s膜,并在兩周后測量CNV面積。缺氧誘導(dǎo)的小鼠新生血管模型( ROP),將出生7天的B6小鼠放入75%氧箱后5天,P12天的小鼠返回正常氧濃度并給予一眼內(nèi)注射1μl1μg/μl rhEDI-8t,另一眼注入磷酸緩沖鹽溶液(Phosphate buffered saline,P

11、BS)作為對照。P17天,檢測RNV平均面積。以及視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞表達(dá)VEGF的轉(zhuǎn)基因動物模型(rho/VEGF mice)。rho/VEGF轉(zhuǎn)基因小鼠在出生后第14天,同窩小鼠的右眼隨機接受1μl(1μg/μl,n=10)endostatin或者1μl(1μg/μl,n=13) rhEDI-8t的眼內(nèi)注射,而左眼則接受1μlPBS作為對照。7天后,即出生后第21天,rho/VEGF轉(zhuǎn)基因小鼠麻醉后以FITC-Dextran做心腔灌注

12、后作全視網(wǎng)膜鋪片并用熒光顯微鏡鏡檢以及計數(shù)。
   結(jié)果:內(nèi)源性血管生長抑制因子rhEDI-8t在體外實驗中,有效抑制了在bFGF刺激下人類臍血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和牛主動脈內(nèi)皮細(xì)胞的遷徙。在幾個體內(nèi)新生血管動物實驗?zāi)P椭?,眼?nèi)注射rhEDI-8t的實驗組,不論對脈絡(luò)膜新生血管的生成,視網(wǎng)膜新生血管,還是視網(wǎng)膜下新生血管都有明顯的抑制作用,具有統(tǒng)計學(xué)差異。
   結(jié)論:內(nèi)源性血管生長抑制因子rhEDI-8t在體內(nèi)和體外實驗中

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