龍芩草噴霧劑對大鼠離體肺泡Ⅱ型上皮細胞的作用機理研究.pdf

1、肺泡Ⅱ型上皮細胞是肺內(nèi)的重要結(jié)構(gòu)細胞,它作為肺泡干細胞能增殖分化為肺泡Ⅰ型上皮細胞,在肺損傷后肺泡上皮的修復(fù)與更新過程中有重要意義.目的:該實驗的目的是用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)復(fù)制急性肺損傷時的肺泡Ⅱ型上皮細胞體外損傷模型,在獨立環(huán)境下觀察肺泡Ⅱ型上皮細胞在增殖和分泌功能方面的損傷情況.同時應(yīng)用已在臨床證明能輔助治療和預(yù)防感染性急性肺損傷的龍芩草噴霧劑進行干預(yù),探討此復(fù)方的作用機理.方法:第一部分:按照D

2、obbs等提供的方法并適當改進分離大鼠肺泡Ⅱ型上皮細胞,用IgG免疫粘附的方法純化分離的細胞,細胞鑒定采取鞣酸染色和AKP方法.第二部分:應(yīng)用體外培養(yǎng)的大鼠肺泡Ⅱ型上皮細胞,觀察脂多糖對其分泌功能及SP-A、SP-B及AQP1mRNA表達的影響,同時進行龍芩草噴霧劑干預(yù)觀察藥物的作用.通過酶聯(lián)免疫吸附法測定細胞培養(yǎng)上清液中TNF-α和IL-8水平變化,運用FQ-PCR方法觀察肺泡Ⅱ型上皮細胞中SP-A、SP-B和AQP1mRNA表達的改

3、變.結(jié)論:1.大鼠肺泡Ⅱ型上皮細胞的分離、純化和鑒定:適當?shù)南笣舛?、時間可提高分離細胞的活力,細胞分離后用IgG免疫粘附方法純化可使純度提高15％,鞣酸染色和AKP鑒定可見Ⅱ型細胞上的特征性板層小體.2.脂多糖單獨作用于體外培養(yǎng)的肺泡Ⅱ型上皮細胞可直接損傷細胞,表現(xiàn)為抑制其增殖;刺激其分泌炎癥因子TNF-α及IL-8增加;使SP-A、SP-B和AQP-1mRNA的表達明顯下降,抑制肺泡Ⅱ型上皮細胞分泌表面活性蛋白和水通道蛋白的功能.