肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞自噬體在結(jié)核分枝桿菌感染過程中作用的研究.pdf

1、結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis，MTb)，俗稱結(jié)核桿菌，是引起結(jié)核病的病原菌[1]。其感染機(jī)制不僅與巨噬細(xì)胞存在密切關(guān)系[2-5]，而且，人們開始意識(shí)到肺泡上皮細(xì)胞在結(jié)核分枝桿菌感染中起著重要的作用[6-10]。結(jié)核分枝桿菌不僅可以入侵，進(jìn)入上皮細(xì)胞[11]，而且可以在肺泡上皮細(xì)胞內(nèi)復(fù)制[12]。
　　肺泡II型上皮細(xì)胞是一組具有多種功能的肺泡保護(hù)性細(xì)胞[13]，在天然免疫過程中發(fā)揮重要的作用[1

2、4]。最近的研究表明，肺泡II型上皮細(xì)胞具有殺菌作用[15]，可將入侵的非毒性肺炎克雷伯桿菌、煙曲霉菌等迅速吞噬并殺滅。其免疫機(jī)制可能和自噬有關(guān)。
　　本研究應(yīng)用RT-PCR的方法，首先肯定了LC3在mRNA在肺泡II型上皮細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞中的表達(dá)。經(jīng)MTB感染A549后，發(fā)現(xiàn)LC3表達(dá)明顯下降。同時(shí)，自噬經(jīng)3-MA抑制的A549細(xì)胞感染Mtb后，細(xì)胞壞死顯著增加。首次證明了A549細(xì)胞感染Mtb自噬受抑，以及自噬對(duì)A549細(xì)胞

3、的保護(hù)作用。
　　為研究自噬體在抵抗結(jié)核分枝桿菌過程中的作用，本實(shí)驗(yàn)特設(shè)計(jì)了針對(duì)Atg5序列的RNAi序列，并將其導(dǎo)入到表達(dá)載體pSilencer?3.1-H1hygro，經(jīng)測(cè)序鑒定，序列完全正確。然后將測(cè)序正確的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞，用WesternBlot檢測(cè)轉(zhuǎn)染效果，結(jié)果表明有很好的基因抑制效果。后進(jìn)一步用該細(xì)胞模型驗(yàn)證自噬體在結(jié)核分枝桿菌感染中的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，經(jīng)RNAi技術(shù)干擾Atg5基因后，自噬體LC3Ⅱ的表達(dá)水平