家蠅幼蟲(chóng)血淋巴中抗腫瘤蛋白的篩選及對(duì)Hep-2細(xì)胞作用機(jī)制初探.pdf

1、目的:篩選3日齡家蠅幼蟲(chóng)血淋巴中的具有抗腫瘤作用的蛋白;通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)初步探討抗腫瘤蛋白對(duì)Hep-2細(xì)胞系的作用機(jī)制。
　　方法:1、家蠅幼蟲(chóng)血淋巴蛋白的制備:采用針刺法提取熱誘導(dǎo)后的3齡家蠅幼蟲(chóng)血淋巴，用固相萃取分離法，以乙腈溶液作洗脫劑，分離純化家蠅幼蟲(chóng)血淋巴中的抗腫瘤蛋白組分。2、抗腫瘤活性檢測(cè):應(yīng)用不同濃度的抗腫瘤蛋白作用于人喉癌Hep-2細(xì)胞系不同作用時(shí)間后，觀察細(xì)胞形態(tài)的變化，MTT抑制率檢測(cè)，篩選抗腫瘤蛋白有效的作用時(shí)

2、間和作用濃度。3、抗腫瘤蛋白對(duì)Hep-2細(xì)胞作用機(jī)制的初步研究:1）觀察腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)增殖抑制情況:選用MTT法檢測(cè)，初步分析對(duì)Hep-2細(xì)胞的抑制效果;2）檢測(cè)腫瘤細(xì)胞凋亡:選用細(xì)胞爬片的HE染色法，初步觀察有無(wú)細(xì)胞凋亡;進(jìn)而提取細(xì)胞DNA進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳分析，觀察是否出現(xiàn)階梯狀凋亡條帶出現(xiàn)，判斷對(duì)細(xì)胞DNA有無(wú)損傷作用;檢測(cè)腫瘤細(xì)胞胞膜變化:掃描電鏡觀察經(jīng)抗腫瘤蛋白作用后的Hep-2腫瘤細(xì)胞，觀測(cè)細(xì)胞膜的改變情況。以上四組實(shí)驗(yàn)均設(shè)正

3、常細(xì)胞對(duì)照。
　　結(jié)果:1）細(xì)胞形態(tài)觀察結(jié)合MTT抑制率檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，10％-50％萃取組分對(duì)Hep-2細(xì)胞的生長(zhǎng)均有抑制作用，并且蛋白濃度在12.5μ g/ml、作用時(shí)間12h的抑制效果較好;同時(shí)發(fā)現(xiàn)40％和50％萃取組分的蛋白對(duì)腫瘤細(xì)胞的增值抑制較為明顯;2）細(xì)胞爬片的HE染色觀察發(fā)現(xiàn)，經(jīng)抗腫瘤蛋白作用后，Hep-2細(xì)胞中出現(xiàn)細(xì)胞核濃縮，核質(zhì)深染成藍(lán)紫色的凋亡小體;DNA凝膠電泳結(jié)果顯示，未見(jiàn)DNA損傷后的階梯狀凋亡條帶;掃描

4、電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，蛋白作用后的Hep-2細(xì)胞胞膜有明顯改變:細(xì)胞表面凹凸不平，有明顯的出泡狀隆起，微絨毛消失，相較于正常細(xì)胞密集的突起。
　　結(jié)論:1）證實(shí)家蠅幼蟲(chóng)血淋巴中具有抑殺腫瘤細(xì)胞作用的蛋白組分，以40％和50％萃取組分對(duì)腫瘤細(xì)胞的增值抑制較為明顯;2）抗腫瘤蛋白作用Hep-2細(xì)胞的最有效作用濃度為12.5μg/mL，最有效作用時(shí)間為12h;3）家蠅幼蟲(chóng)血淋巴中抗腫瘤蛋白能促進(jìn)Hep-2腫瘤細(xì)胞凋亡，細(xì)胞膜形態(tài)發(fā)生明顯改變，而