JAK2-STAT3信號(hào)通道介導(dǎo)粒細(xì)胞集落刺激因子影響大鼠腦出血后細(xì)胞凋亡的相關(guān)研究.pdf

1、目的:腦出血是臨床的常見病、多發(fā)病，致死率較高，發(fā)病機(jī)制不明，缺乏有效的治療方法，明確發(fā)病機(jī)制，尋找治療的分子靶點(diǎn)尤為重要。本實(shí)驗(yàn)通過研究粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)直接作用于大鼠腦出血(ICH)后，凋亡細(xì)胞及通道蛋白P-JAK2和P-STAT3的變化，探討JAK2/STAT3信號(hào)傳導(dǎo)通路介導(dǎo)G-CSF對(duì)腦出血的抗凋亡作用。
　　方法:健康成年SD大鼠120只，雌雄不限，體重在250～300g之間，鼠齡2～3月，分為對(duì)照組、腦

2、出血組、治療組，各組按斷頭取腦的時(shí)間點(diǎn)不同分為6h、24h、48h、72h、168h5個(gè)亞組。腦出血組以大鼠自體尾動(dòng)脈不凝血50μL，采用改良二次注入法建立大鼠腦出血模型;對(duì)照組以50μ L生理鹽水代替自體動(dòng)脈血;治療組的各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均在手術(shù)后1h腹腔注射G-CSF60μ g/kg，其中6h組共注射1次，24h組共注射2次，48h組共注射3次，72h組共注射4次，168h組共注射5次，注射的時(shí)間間隔為12h。造模成功后，分別取各時(shí)間點(diǎn)大鼠

3、行神經(jīng)功能障礙評(píng)分。評(píng)分后，用1％戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，迅速斷頭取腦，將腦組織放于4％中性甲醛溶液中固定保存，以作石蠟包埋、切片，用于HE染色，P-JAK2、P-STAT3免疫組化染色及TUNEL法測(cè)定細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)果:(1)腦出血組神經(jīng)功能障礙評(píng)分與對(duì)照組對(duì)應(yīng)的各時(shí)間點(diǎn)比較，評(píng)分較低(P＜0.05)，神經(jīng)功能缺損較重;治療組與腦出血組對(duì)應(yīng)的各時(shí)間點(diǎn)比較，評(píng)分增高(P＜0.05)，神經(jīng)功能受損減輕;腦出血組、治療組神經(jīng)功能障

4、礙評(píng)分均在48h最低(P＜0.05)，神經(jīng)功能受損最重;(2)HE染色可見對(duì)照組的腦組織結(jié)構(gòu)完整，胞核、胞漿染色均勻;腦出血組6h、24h血腫周圍神經(jīng)細(xì)胞水腫明顯，可見大量血細(xì)胞，少量炎癥細(xì)胞，48h、72h時(shí)間點(diǎn)時(shí)血腫周圍神經(jīng)細(xì)胞腫脹壞死明顯，核固縮，部分核溶解，染色深，血細(xì)胞減少，炎細(xì)胞侵潤(rùn)，少量膠質(zhì)細(xì)胞增生，168h可見血腫周圍神經(jīng)細(xì)胞水腫較前減輕，炎細(xì)胞減少，膠質(zhì)細(xì)胞增生明顯;治療組的腦組織結(jié)構(gòu)變化在6h和24h與腦出血組相似，

5、48h、72h和168h神經(jīng)細(xì)胞腫脹壞死范圍較腦出血組小，仍可見炎癥細(xì)胞侵潤(rùn)及膠質(zhì)細(xì)胞增生;(3)腦出血組、治療組凋亡細(xì)胞6h可見極少量表達(dá)，24h、48h開始明顯增多，72達(dá)高峰(P＜0.05)，168h仍有表達(dá)，分別與對(duì)照組的各亞組比較，表達(dá)增多(P＜0.05);治療組與腦出血組對(duì)應(yīng)的各時(shí)間點(diǎn)比較，表達(dá)減少(P＜0.05);(4)腦出血組、治療組P-JAK2、P-STAT3陽(yáng)性細(xì)胞6h可見少量表達(dá)，24h明顯增多，48h達(dá)高峰(P＜

6、0.05)，72h開始減少，168h仍有表達(dá)，分別與對(duì)照組比較，表達(dá)增多(P＜0.05);治療組與腦出血組比較，表達(dá)減少(P＜0.05);(5)腦出血組神經(jīng)功能障礙評(píng)分與凋亡細(xì)胞、P-JAK2、P-STAT3的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.637，r=-0.848，r=-0.848; P＜0.05），凋亡細(xì)胞與P-JAK2、P-STAT3的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.466，r=0.760; P＜0.05)。
　　結(jié)論:粒細(xì)胞集落刺激因子能明