粒細胞集落刺激因子治療新生大鼠重度缺氧缺血性腦病的實驗研究.pdf

1、目的：皮下注射粒細胞集落刺激因子(GranulocyteColony-StimulatingFactor,G-CSF)對新生大鼠重度缺氧缺血性腦損傷(HypoxicIschemicBrainDamage，HIBD)模型進行治療，從神經運動功能、整體水平和細胞水平觀察治療后大鼠的損傷恢復情況。從而研究G-CSF治療重度缺氧缺血性腦病(Hypoxic-IschemicEncephalopathy,HIE)的有關機制，為臨床治療提供一定的理論

2、基礎。 方法： 1.大鼠重度HIBD模型制作及鑒定7日齡SD乳鼠，麻醉后雙重結扎并剪斷左側頸總動脈，恢復2～3小時后，放入8％O2+92％N2的容器中2.5小時，用水浴箱控制環(huán)境溫度在39℃左右。鑒定建模是否成功及損傷程度。 2.G-CSF治療HIE時間窗的選擇正常7日齡SD乳鼠皮下注射G-CSF，流式細胞儀檢測注射G-CSF后外周血CD34+/WBC的變化趨勢。 3.G-CSF治療HIE建模成功的乳鼠隨

3、機分為3組，雙時相組(HG2)、單時相組(HG1)和HIBD(H)組，按照A、B、C各組時間窗的選擇分別給予G-CSF，并采用累積法BrdU腹腔注射。 4.觀察療效設定時間點采用大鼠改良神經功能缺陷評分(ModifiedNeurologicalSeverityScore，mNSS)法對各組大鼠進行行為學觀察，并對其大腦進行解剖及病理學觀察，檢測大腦梗死灶，神經元排列情況，凋亡細胞數(shù)及新生神經前體細胞、神經元及神經膠質細胞的數(shù)目。

4、 結果： 1.模型鑒定HIBD后所有模型動物行為異常，大腦重量減輕，可見明顯梗死灶。HE及Niss1染色可見神經元排列紊亂，細胞腫脹，核仁及尼氏小體不清。損傷部位以皮層、海馬為甚。 2.運動功能建模完成后所有大鼠的mNSS評分較高。經G-CSF治療14天后，治療組mNSS評分較對照組明顯降低，且HG2組評分較HG1組明顯減低。 3.腦重：經G-CSF治療后大腦重量明顯增加，且HG2組大腦重量明顯高于HG1

5、組。TTC染色顯示G-CSF治療組平均梗死灶體積較對照組減小，且HG2組效果明顯優(yōu)于HG1組。 4.神經元：采用HE及Niss1染色，可見G-CSF治療組神經元較對照組排列整齊、有序，組織恢復較明顯。且HG2組較HG1組大腦細胞排列緊密，神經元形態(tài)、結構接近正常大腦，未見空泡形成，細胞內布滿尼氏小體。 5.神經細胞生長：經G-CSF治療后，腦缺血區(qū)域的凋亡神經元減少了74.53％，而新生的神經前體細胞、神經元、神經膠質細

6、胞較對照組明顯增多。 結論： 1.本研究改良的建模方法表明，模型鼠的運動行為落后，大腦損傷程度較經典的建模方法嚴重，動物的死亡率比經典建模方法高，提示本研究的改良建模方法成功可行，可供同行借鑒運用。 2.SD乳鼠雙時相注射G-CSF后外周血造血干細胞長時間維持較高水平，為造血干細胞向中樞神經系統(tǒng)遷移提供了更多的細胞數(shù)量，進一步提高G-CSF的神經保護作用。 3.G-CSF對新生大鼠的重度HIE具有良好的神