化療后骨髓再生細胞移植治療大鼠缺氧缺血性腦病的實驗研究.pdf

1、圍產(chǎn)期窒息所致缺氧缺血性腦病（hypoxic-ischemic encepholopathy,HIE）是新生兒期危害最大的常見病之一，常引起新生兒死亡和神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育障礙。目前臨床上尚無有效的治療藥物和方法，因此探討HIE 新的治療方法具有十分重要的意義。骨髓干細胞(bone marrow stem cells BMSCs)指來源于骨髓的具有分化潛能的細胞，亦稱骨髓衍化細胞，主要包括造血干細胞(hematopoietic stem cel

2、ls， HSCs)、骨髓間充質(zhì)干細胞(bone－mesenchymal stem Cells BMSCs)和內(nèi)皮前體細胞（endothelial cell progenitors ECP）等。作為神經(jīng)移植的來源細胞, BMSCs具有獨特的優(yōu)越性,體內(nèi)實驗證明BMSCs能明顯改善缺血大鼠的神經(jīng)功能，其可能機制主要為分泌多種營養(yǎng)因子和細胞因子，從而激活內(nèi)源性修復機制促進神經(jīng)修復和功能恢復。5－氟尿嘧啶（5－Fu）預處理后的大鼠，其BMSCs

3、各種營養(yǎng)因子表達量明顯增加，尤為各種促血管生長因子，稱之為骨髓再生細胞（Bone Marrow Regenerative Cells，BMRCs）。BMRCs植入HIE大鼠腦內(nèi)后，能否存活、遷移至損傷部位？能否激活內(nèi)源性修復機制從而促進神經(jīng)修復和功能恢復？與普通BMSCs相比，是否具有更大的治療潛能？為此，進行了以下研究. 本實驗的目的: 在于探討B(tài)MRCs移植后對HIE大鼠神經(jīng)功能恢復的影響，并進一步探討這此種細胞在治療HIE

4、中的價值及可能的機制。 實驗方法：制作新生大鼠HIE模型，隨機分為假手術組、PBS治療組(HIE/PBS group)、骨髓干細胞移植組(HIE/BMSCs group)、骨髓再生細胞移植組(HIE/BMRCs group)。HIE模型制作后后第3天，分別將3微升PBS、DAPI標記后的BMSCs及BMRCs經(jīng)右側(cè)側(cè)腦室移植入HIE大鼠腦內(nèi)。各組大鼠分別于移植后第三周進行行為學檢測，并應用熒光激發(fā)檢測移植的細胞在腦內(nèi)存活情況，采

5、用HE染色和免疫組化法檢測缺血區(qū)病理改變及新生的血管，用RT-PCR法檢測VEGF-mRNA的表達情況，用TUNEL法檢測細胞凋亡。 實驗結果：本模型穩(wěn)定可靠、重復性好。行為學檢測提示，BMRCs治療組的感覺運動功能明顯改善（P<0.05）。經(jīng)PCR檢測發(fā)現(xiàn)，BMRCs治療后的大鼠，其腦內(nèi)VEGF-mRNA表達量明顯增加，在其后的免疫組化檢測及原位雜交檢測中，我們進一步發(fā)現(xiàn)治療后大鼠腦內(nèi)新生血管明顯增多、凋亡細胞顯著減少。