膠質(zhì)細(xì)胞原性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子微囊局部應(yīng)用于臂叢神經(jīng)根性撕脫傷神經(jīng)根回植動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：在手術(shù)顯微鏡下建立臂叢神經(jīng)根性撕脫傷神經(jīng)根原位回植大鼠動(dòng)物模型，并制備膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子GDNF微囊，觀察局部應(yīng)用GDNF(glialcellline-derivedneurotrophicfactor)微囊的臂叢神經(jīng)根原位回植后的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物3、6個(gè)月后大鼠的神經(jīng)肌肉恢復(fù)情況及神經(jīng)根回植處脊髓及遠(yuǎn)端神經(jīng)纖維組織學(xué)改變，為臨床治療臂叢神經(jīng)根性撕脫傷提供一種思路或方法。 方法：第一部分：臂叢神經(jīng)根性撕脫傷神經(jīng)根回植實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

2、模型的建立。成年雄性Wistar大鼠36只隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組和失神經(jīng)組。經(jīng)后入路將C6神經(jīng)根從脊髓上撕脫下來(lái)，并將C5、7、8及Tl神經(jīng)根自其穿出椎間孔處切斷，斷端結(jié)扎包埋，形成臂叢神經(jīng)根性撕脫模型。并對(duì)動(dòng)物模型進(jìn)行電生理學(xué)，肱二頭肌肌肉濕重及組織學(xué)檢測(cè)。 第二部分：GDNF-PLGA微囊的制備及其特性測(cè)定。利用W/O/W復(fù)乳溶劑揮發(fā)法制作GDNF-PLGA微囊，并對(duì)微囊的產(chǎn)率、載藥量、包裹率、微囊中藥物體外釋放及微囊內(nèi)GDNF生物

3、學(xué)活性進(jìn)行測(cè)定。 第三部分：GDNF-PLGA微囊促進(jìn)臂叢神經(jīng)根性撕脫傷后神經(jīng)根回植修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究。將制備的GDNF-PLGA微囊放置于臂叢神經(jīng)根性撕脫傷神經(jīng)根回植的局部，并于3、6個(gè)月后進(jìn)行電生理學(xué)，肱二頭肌肌肉濕重及組織學(xué)檢測(cè)。 結(jié)果：l、術(shù)后3、6個(gè)月運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位的潛伏期明顯比正常對(duì)照側(cè)延長(zhǎng)，差別十分顯著(p＜0.01)；波幅亦明顯較正常對(duì)照側(cè)為低，差別十分顯著(p＜0.01)；且3個(gè)月組運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位的潛伏期比6個(gè)

4、月組長(zhǎng)，波幅較6個(gè)月組低，差別十分顯著(p＜0.01)。術(shù)后3、6個(gè)月肌肉濕重恢復(fù)率明顯高于失神經(jīng)組，差別十分顯著(p＜0.01)；且6個(gè)月組肌肉濕重恢復(fù)率比3個(gè)月組高，差別顯著(0.0l＜p＜0.05)。術(shù)后3、6個(gè)月時(shí)回植C6神經(jīng)根的再生有髓神經(jīng)纖維數(shù)量明顯少于正常對(duì)照組數(shù)量(0.0l＜p＜0.05及p＜0.01)，但隨時(shí)間的延長(zhǎng)再生神經(jīng)纖維數(shù)量明顯增多，且6個(gè)月組明顯多于3個(gè)月組(p＜0.01)。 2、微囊符合無(wú)菌規(guī)定；微

5、囊呈球形，大小均一，表面光滑，分散好，成囊率為93％；微囊的產(chǎn)率為59.10％；微囊的載藥量及包裹率分別是0.154ug/mg和46％；制備的微囊體外藥物釋放過(guò)程中存在突釋現(xiàn)象，3天后藥物的釋放趨于穩(wěn)定，而且30天內(nèi)絕大多數(shù)藥物從微囊釋放出來(lái)；所制備的GDNF-PLGA微囊中的GDNF具有生物活性。 3、術(shù)后3、6個(gè)月運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位的潛伏期明顯比對(duì)照組短，差別顯著(p＜0.01及p＜0.05)；波幅亦明顯較對(duì)照組為高，差別顯著(p

6、＜0.01及p＜0.05)。術(shù)后3、6個(gè)月肌肉濕重恢復(fù)率與對(duì)照組差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。術(shù)后3、6個(gè)月時(shí)回植C6神經(jīng)根的再生有髓神經(jīng)纖維數(shù)量明顯多于對(duì)照組數(shù)量(p＜0.01及0.01＜p＜0.05)，且術(shù)后6個(gè)月實(shí)驗(yàn)組再生有髓神經(jīng)纖維數(shù)量與正常對(duì)照側(cè)比較在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)差別(p＞0.05)。 結(jié)論：1、經(jīng)后路臂叢神經(jīng)根性撕脫傷神經(jīng)根回植入脊髓的動(dòng)物模型，經(jīng)電生理學(xué)、組織學(xué)測(cè)定及肌肉濕重恢復(fù)率測(cè)定顯示，手術(shù)入路較為簡(jiǎn)單，神經(jīng)

7、根回植入脊髓確切，軸突再生后的再生有髓神經(jīng)纖維能夠經(jīng)再植入脊髓的神經(jīng)根向遠(yuǎn)端延伸，并產(chǎn)生肌肉濕重恢復(fù)率逐步增高的結(jié)果，為一成功的臂叢神經(jīng)根性撕脫傷神經(jīng)根回植入脊髓的動(dòng)物模型。 2、本試驗(yàn)采用復(fù)乳溶劑揮發(fā)法制備了GDNF-PLGA微囊，并采用60Co放射源對(duì)凍干微囊進(jìn)行輻照滅菌。通過(guò)對(duì)微囊特性的一系列研究測(cè)定及無(wú)菌檢查和GDNF活性測(cè)定證明微囊形態(tài)良好，含有一定濃度和活性的GDNF，并能將其緩慢釋放， 3、局部應(yīng)用GDNF