尋常型銀屑病角質形成細胞及HaCaT細胞株糖酵解的初步研究.pdf

1、目的:尋常型銀屑病是一種慢性炎癥性皮膚病，具有表皮增殖過度、角化不全、真皮淺層毛細血管擴張及淋巴細胞浸潤等特征，其表皮與惡性腫瘤存在細胞過度增殖和局域性缺氧等共同特點。缺氧誘導因子-1α(Hypoxia-induciblefactor-1α，HIF-1α)在腫瘤中能激活大部分糖酵解相關酶從而促使細胞代謝主要朝糖酵解方向進行。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)CD147分子在銀屑病患者皮損區(qū)及外周血細胞中高表達，并且是銀屑病的易感基因之一，我們還發(fā)現(xiàn)CD

2、147在惡性黑素瘤糖酵解過程中發(fā)揮重要作用，同時也能在HIF-1α的調節(jié)下介導腫瘤的侵襲轉移。本文旨在探討在尋常型銀屑病和人類永生化角質形成細胞HaCaT細胞株中，HIF-1α、CD147及糖酵解相關蛋白可能發(fā)揮的作用及相互關系，為進一步揭示銀屑病的發(fā)病機制提供新的理論依據(jù)。
　　方法:1、免疫組化法分析HIF-1α、CD147、葡萄糖轉運體1(GlucoseTransporter1，GLUT1)、糖酵解關鍵酶己糖激酶(Hexok

3、inase2，HK2)、丙酮酸激酶(Pyruvatekinase2，PKM2)在尋常型銀屑病皮損區(qū)及正常人表皮中的表達及分布，并行相關性分析;
　　2、構建小分子干擾片段RNA(SmallinterferingRNA，siRNA)并在HaCaT細胞中干擾HIF-1α蛋白表達，WesternBlot檢測HIF-1α、CD147、GLUT1、HK2、PKM2蛋白表達的變化;
　　3、CoCl2誘導HaCaT細胞化學缺氧，West

4、ernBlot檢測HIF-1α、CD147、GLUT1、HK2、PKM2蛋白表達的變化;
　　4、免疫熒光共聚焦法檢測CD147和GLUT1蛋白在銀屑病皮損表皮中表達的共定位;
　　5、siRNA干擾/過表達HaCaT細胞中CD147蛋白，WesternBlot檢測CD147、GLUT1蛋白表達的變化;
　　6、siRNA干擾/過表達HaCaT細胞中GLUT1蛋白，WesternBlot檢測GLUT1、CD147蛋白表

5、達的變化。
　　結果:1、HIF-1α、CD147、GLUT1、HK2、PKM2蛋白均在尋常型銀屑病皮損區(qū)較正常人表皮表達增高，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);
　　2、尋常型銀屑病皮損中HIF-1α、CD147與GLUT1蛋白的表達兩兩存在正相關性(P＜0.05)，HK2、PKM2與其它指標均無相關性（P＞0.05）;
　　3、HaCaT細胞中干擾HIF-1α表達后，HIF-1α、CD147、GLUT1及HK2蛋

6、白表達均顯著下降(P＜0.05)，PKM2表達無明顯差異(P＞0.05);
　　4、CoCl2誘導HaCaT細胞化學缺氧后，HIF-1α、CD147、GLUT1及HK2蛋白表達均顯著上升(P＜0.05)，PKM2的表達無明顯差異(P＞0.05);
　　5、CD147和GLUT1蛋白在尋常型銀屑病皮損區(qū)表達具有共定位現(xiàn)象，均分布在基底層細胞及棘層部分細胞的細胞膜上;
　　6、在HaCaT細胞中分別干擾和過表達CD147蛋