促紅細胞生成素對葉酸在Caco-2細胞中跨膜轉運的影響及機制.pdf

1、促紅細胞生成素(EPO)是臨床上治療腎性貧血的經(jīng)典藥物。有文獻指出，在某些病例中患者體內鐵、葉酸等造血營養(yǎng)素的代謝水平是影響EPO療效的重要因素。最近的研究發(fā)現(xiàn)，EPO除了在骨髓內直接刺激造血細胞分化成熟外，還可通過調節(jié)鐵的腸道吸收參與鐵的代謝調控。然而，葉酸的代謝是否也受EPO調控仍不清楚。葉酸不能為人體自身合成且只能由外源性食物供給，因此腸道吸收在整個代謝過程中至關重要。葉酸的腸道吸收是依賴主動轉運的過程，涉及的轉運體包括PCFT(

2、proton-coupled folate transporter)，RFC(reducedfolate carrier)和MRP2(multidrug resistance-associated protein2)。另一方面，EPO與其受體結合后可激活JAK-2(janus protein tyrosine kinase2)、ERK(extracellular signal regulated kinases)和PI3/Akt(pho

3、sphatidylinositol3kinase/Akt)三條信號通路并介導下游基因的表達調控。因此，我們假設EPO可調控葉酸的腸道吸收，PCFT、RFC和MRP2功能、表達、定位的變化與之相關，JAK-2、ERK和PI3/Akt信號通路在此調控過程中發(fā)揮重要作用。
　　本課題采用人結腸腺癌細胞系(human colon adenocarcinoma cell line) Caco-2單層細胞模型考察EPO對葉酸跨膜轉運的影響及機

4、制。通過雙向轉運實驗發(fā)現(xiàn)EPO可劑量依賴地促進葉酸在攝取方向的跨膜轉運，同時高劑量EPO對葉酸在外排方向的跨膜轉運也具有促進作用;通過RT-PCR和Western blot發(fā)現(xiàn)EPO可上調葉酸轉運體PCFT、RFC、以及MRP2表達，并呈劑量依賴關系和時間依賴關系;通過激光共聚焦顯微鏡縱軸掃描發(fā)現(xiàn)EPO影響下PCFT在Caco-2細胞內的亞細胞分布發(fā)生變化;通過普伐他汀外排實驗佐證了EPO對MRP2表達的影響;通過特異性的信號抑制劑阻斷

5、EPO刺激下JAK-2、ERK、以及PI3K/Akt信號通路的活化考察葉酸轉運體表達的變化，發(fā)現(xiàn)上述信號轉導通路的失活對EPO介導葉酸轉運體的表達調控存在影響。綜上所述，我們的結果表明EPO可直接作用于腸道細胞參與調節(jié)葉酸的轉運:其中吸收方向轉運的增強可能與PCFT、RFC的表達上調以及PCFT分子亞細胞分布的變化相關;外排方向的轉運增強與MRP2的表達上調相關;JAK-2、ERK以及PI3/Akt信號轉導途徑在調控PCFT、RFC和M