促紅細(xì)胞生成素對葉酸在Caco-2細(xì)胞中跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的影響及機(jī)制.pdf

1、促紅細(xì)胞生成素(EPO)是臨床上治療腎性貧血的經(jīng)典藥物。有文獻(xiàn)指出，在某些病例中患者體內(nèi)鐵、葉酸等造血營養(yǎng)素的代謝水平是影響EPO療效的重要因素。最近的研究發(fā)現(xiàn)，EPO除了在骨髓內(nèi)直接刺激造血細(xì)胞分化成熟外，還可通過調(diào)節(jié)鐵的腸道吸收參與鐵的代謝調(diào)控。然而，葉酸的代謝是否也受EPO調(diào)控仍不清楚。葉酸不能為人體自身合成且只能由外源性食物供給，因此腸道吸收在整個代謝過程中至關(guān)重要。葉酸的腸道吸收是依賴主動轉(zhuǎn)運(yùn)的過程，涉及的轉(zhuǎn)運(yùn)體包括PCFT(

2、proton-coupled folate transporter)，RFC(reducedfolate carrier)和MRP2(multidrug resistance-associated protein2)。另一方面，EPO與其受體結(jié)合后可激活JAK-2(janus protein tyrosine kinase2)、ERK(extracellular signal regulated kinases)和PI3/Akt(pho

3、sphatidylinositol3kinase/Akt)三條信號通路并介導(dǎo)下游基因的表達(dá)調(diào)控。因此，我們假設(shè)EPO可調(diào)控葉酸的腸道吸收，PCFT、RFC和MRP2功能、表達(dá)、定位的變化與之相關(guān)，JAK-2、ERK和PI3/Akt信號通路在此調(diào)控過程中發(fā)揮重要作用。
　　本課題采用人結(jié)腸腺癌細(xì)胞系(human colon adenocarcinoma cell line) Caco-2單層細(xì)胞模型考察EPO對葉酸跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的影響及機(jī)

4、制。通過雙向轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)EPO可劑量依賴地促進(jìn)葉酸在攝取方向的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，同時高劑量EPO對葉酸在外排方向的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)也具有促進(jìn)作用;通過RT-PCR和Western blot發(fā)現(xiàn)EPO可上調(diào)葉酸轉(zhuǎn)運(yùn)體PCFT、RFC、以及MRP2表達(dá)，并呈劑量依賴關(guān)系和時間依賴關(guān)系;通過激光共聚焦顯微鏡縱軸掃描發(fā)現(xiàn)EPO影響下PCFT在Caco-2細(xì)胞內(nèi)的亞細(xì)胞分布發(fā)生變化;通過普伐他汀外排實(shí)驗(yàn)佐證了EPO對MRP2表達(dá)的影響;通過特異性的信號抑制劑阻斷

5、EPO刺激下JAK-2、ERK、以及PI3K/Akt信號通路的活化考察葉酸轉(zhuǎn)運(yùn)體表達(dá)的變化，發(fā)現(xiàn)上述信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的失活對EPO介導(dǎo)葉酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)調(diào)控存在影響。綜上所述，我們的結(jié)果表明EPO可直接作用于腸道細(xì)胞參與調(diào)節(jié)葉酸的轉(zhuǎn)運(yùn):其中吸收方向轉(zhuǎn)運(yùn)的增強(qiáng)可能與PCFT、RFC的表達(dá)上調(diào)以及PCFT分子亞細(xì)胞分布的變化相關(guān);外排方向的轉(zhuǎn)運(yùn)增強(qiáng)與MRP2的表達(dá)上調(diào)相關(guān);JAK-2、ERK以及PI3/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在調(diào)控PCFT、RFC和M