雙乙酸鈉和曲酸對(duì)關(guān)中黑豬精液常溫保存效果的研究.pdf

1、稀釋粉質(zhì)量決定了公豬精液稀釋后、人工授精前的質(zhì)量，繼而影響輸精后母豬的繁殖成績(jī)。由于精液受到細(xì)菌的污染是無(wú)法避免的，細(xì)菌的增殖會(huì)對(duì)精液保存造成不利影響;同時(shí)精子在保存和運(yùn)輸過(guò)程中產(chǎn)生的活性氧(ROS)和抗氧化劑之間的不平衡誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激(OS)狀態(tài)能夠損傷精子，因此稀釋粉中添加抑菌劑和抗氧化劑是常規(guī)選擇。目前市場(chǎng)上用于常溫保存豬精液的稀釋粉主要是針對(duì)瘦肉型豬種研發(fā)的，對(duì)于關(guān)中黑豬等培育品種的研究很少。本研究將抑菌劑雙乙酸鈉(SDA)和抗

2、氧化劑曲酸(Kojic acid)應(yīng)用到關(guān)中黑豬精液的常溫保存中，通過(guò)抑菌性試驗(yàn)、精子活率、質(zhì)膜完整率、線(xiàn)粒體完整性、頂體完整率和總抗氧化能力(T-AOC)等指標(biāo)檢測(cè)，探究SDA替代慶大霉素的可行性和曲酸對(duì)精子的保護(hù)作用，為關(guān)中黑豬精液稀釋粉的研發(fā)提供技術(shù)支持。本研究主要獲得以下結(jié)果:
　　1.關(guān)中黑豬精液稀釋保存過(guò)程中檢測(cè)到的細(xì)菌超過(guò)100種，保存初期精液中細(xì)菌以革蘭氏陽(yáng)性菌居多:葡萄球菌科(Staphylococcus)24.

3、13％、鏈球菌科(Streptococcus)13.39％、氣球菌科(Aerococcaceae）11.84％和芽孢桿菌科(Bacillaceae)6.91％等;隨保存時(shí)間延長(zhǎng)，革蘭氏陰性菌以腸桿菌科Enterobacteriaceae）為主的比例上升，到第5d占絕大部分(97.76％);
　　2.雙乙酸鈉對(duì)大腸桿菌(Escherichia coli)具有一定的抑制作用，但抑菌效果不如慶大霉素。在LB固體培養(yǎng)基中雙乙酸鈉對(duì)魯菲不動(dòng)

4、桿菌(Acinetobacter lwoffii)和金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑菌圈直徑大小隨濃度增大而顯著增大;在分別加有魯菲不動(dòng)桿菌和金黃色葡萄球菌的LB液體培養(yǎng)基中，其OD值隨雙乙酸鈉濃度增大而顯著降低。較高濃度(＞0.8 g/L)雙乙酸鈉對(duì)魯菲不動(dòng)桿菌、金黃色葡萄球菌的抑制效果與慶大霉素相近;
　　3.添加濃度高于0.2 g/L的雙乙酸鈉對(duì)稀釋后精液的滲透壓有顯著影響。BTS液中添加0～

5、0.8g/L雙乙酸鈉對(duì)精液保存效果呈先增后減的變化。單獨(dú)添加0.2 g/L雙乙酸鈉保存至第5d時(shí)，能有效抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，提高精子活率、質(zhì)膜、頂體和線(xiàn)粒體完整性。BTS液中添加高濃度(＞1g/L)的雙乙酸鈉不利于關(guān)中黑豬精子保存;
　　4.BTS液中添加0.2 g/L雙乙酸鈉替代40％的慶大霉素能夠達(dá)到等同于250 mg/L慶大霉素對(duì)精液的保存效果;
　　5.BTS液中添加0.1 g/L濃度以?xún)?nèi)的曲酸能夠有效提高精子質(zhì)膜、頂體完

6、整性，提升精子的總抗氧化能力。其中0.04 g/L濃度組保存效果最好，保存第5d時(shí)精子活率為61.45％，可將精子有效保存時(shí)間延長(zhǎng)2d，0.06 g/L濃度組與之差異不顯著;
　　6.不同濃度雙乙酸鈉+曲酸組合整體上相對(duì)于空白對(duì)照組有利于關(guān)中黑豬精子的保存，對(duì)活率、頂體完整率均有提高作用，但二者聯(lián)合使用沒(méi)有顯著的增益效果。
　　綜上所述，關(guān)中黑豬精液常溫保存過(guò)程中出現(xiàn)的細(xì)菌中革蘭氏陰性菌呈遞增趨勢(shì)，其中腸桿菌科Enterob