妊娠期血糖異常對(duì)仔鼠生長(zhǎng)發(fā)育及糖代謝的影響.pdf

1、1989年，David Barker等報(bào)道了低出生體重與成人期一些慢性疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)。自此，胎兒生長(zhǎng)發(fā)育和成人慢性疾病間的關(guān)聯(lián)性引起流行病學(xué)家極大關(guān)注。哺乳類胎兒在母親子宮內(nèi)的生長(zhǎng)發(fā)育完全依賴于母體供給營(yíng)養(yǎng)，因而母親的營(yíng)養(yǎng)和代謝情況直接影響著胎兒的生長(zhǎng)發(fā)育。母親孕期如果出現(xiàn)代謝紊亂高血糖癥狀，必然會(huì)影響到胎兒宮內(nèi)和產(chǎn)后的生長(zhǎng)發(fā)育。在我國(guó)，糖尿病和妊娠期糖尿病(Gestational diabetic mellitus，GDM)的發(fā)病

2、率比較高，且呈現(xiàn)出逐年上升的趨勢(shì)。國(guó)外對(duì)孕期高血糖的研究主要集中在畸胎和巨大兒方面，國(guó)內(nèi)研究則側(cè)重于孕期高血糖所致的不良妊娠結(jié)局上。孕期血糖異常對(duì)子代產(chǎn)后健康的長(zhǎng)期效應(yīng)國(guó)內(nèi)報(bào)道很少。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立孕期血糖異常大鼠模型，觀察孕期高血糖大鼠其仔鼠的生后生長(zhǎng)發(fā)育情況，為采取早期綜合干預(yù)提供理論依據(jù)。 材料和方法： 一、材料 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性Wistar大鼠18只，體重360～400g；雌性Wistar大鼠36

3、只，體重230～270g，購(gòu)于中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。 2、主要試劑 鏈脲菌素(streptozotocin，STZ)，血糖試紙條，胰島素放射免疫試劑盒。 二、方法 1、妊娠期血糖異常大鼠模型的建立 Wistar大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，于下午4：30雌雄2：1合籠，次晨發(fā)現(xiàn)陰栓或檢查陰道涂片發(fā)現(xiàn)精子者定為孕1天，單籠飼養(yǎng)。未孕鼠雌雄分開，于下午4：30再次合籠，如此循環(huán)，兩周后未受孕的雌鼠棄之。把

4、懷孕大鼠隨機(jī)分為兩組：STZ組24只，對(duì)照組7只。孕5天STZ組于禁食12h后腹腔注射新配置的2％STZ(40mg/kg體重)，對(duì)照組注射等量的PH為4.5的0.1mol/L，檸檬酸緩沖液。兩組分別于孕13、16、19天晨起尾尖采血，測(cè)空腹血糖水平(禁食12h)。STZ組中孕鼠3次血糖值只要有1次大于5.55mmol/L就歸為實(shí)驗(yàn)組，3次血糖值均小于5.55mmol/L的剔除。動(dòng)物室溫度22±3℃，相對(duì)濕度45％～55％，自由飲水?dāng)z食。

5、記錄孕鼠孕1天和孕21天體重，仔鼠于分娩后12h內(nèi)稱重，以后每周稱重。仔鼠3w識(shí)性別，4w斷乳，雌雄分籠飼養(yǎng)，每籠2～3只，喂養(yǎng)至12w齡。 2、仔鼠早期生理發(fā)育指標(biāo)檢查,張耳、出牙、開眼。 3、仔鼠反射發(fā)育指標(biāo)檢查斷崖回避反射、平面翻正反射、負(fù)向趨地性反射。 4、學(xué)習(xí)記憶測(cè)定跳臺(tái)實(shí)驗(yàn) 5、標(biāo)本采集與處理。 (1)血清采集仔鼠分別在6w末和12w末，禁食12h后，于下腔靜脈采血10ml，處死。采

6、集的血樣在室溫下靜置2h后，以3000r/min離心20min，分離血清，密封，于-70℃深凍冰箱保存，待測(cè)。 (2)各臟器取材剖開腹腔，分離肝臟和腎臟，稱重并記錄。沿顱縫剪開，暴露大腦，迅速取出大腦，稱重并記錄。 6、指標(biāo)的檢測(cè)(1)空腹血糖(FBS)水平測(cè)定：鄰甲苯胺法(2)空腹血清胰島素(FINS)水平測(cè)定：放射免疫分析法7、統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS11.5軟件包，數(shù)據(jù)結(jié)果用x±s表示，兩組行為指標(biāo)達(dá)標(biāo)率的比較采用卡方

7、檢驗(yàn)，其它指標(biāo)用t檢驗(yàn)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1、孕期血糖異常大鼠模型建立(1)兩組母鼠孕期血糖水平孕13、16、19天實(shí)驗(yàn)組孕鼠平均血糖水平明顯高于對(duì)照組(P<0.05)；并且實(shí)驗(yàn)組孕鼠血糖水平隨孕齡有明顯增高現(xiàn)象。 (2)兩組母鼠孕初體重、孕期體重增量及產(chǎn)仔數(shù)比較兩組母鼠孕初的體重和產(chǎn)仔數(shù)差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但實(shí)驗(yàn)組的母鼠整個(gè)孕期體重增量顯著小于對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 2、孕

8、期血糖異常對(duì)仔鼠身體發(fā)育的影響(1)兩組仔鼠體重變化情況從出生到12w實(shí)驗(yàn)組仔鼠體重一直明顯低于對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；兩組仔鼠體重隨周齡均呈上升趨勢(shì)。 (2)兩組仔鼠6w、12w各臟器體重比6w齡和12w齡時(shí)兩組仔鼠的肝體比、腎體比和腦體比差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 3、孕期血糖異常對(duì)仔鼠神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育影響(1)兩組仔鼠早期生理發(fā)育和反射發(fā)育的比較張耳、出牙、開眼和斷崖回避反射兩組的達(dá)標(biāo)率差異無(wú)

9、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。負(fù)向趨地反射和平面翻正反射實(shí)驗(yàn)組達(dá)標(biāo)率明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。 (2)兩組仔鼠學(xué)習(xí)和記憶能力的比較實(shí)驗(yàn)組雌性仔鼠學(xué)習(xí)能力表現(xiàn)差于對(duì)照組(P<0.05)，記憶能力兩組間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)組雄性仔鼠在學(xué)習(xí)能力和記憶能力與對(duì)照組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 4、孕期血糖異常對(duì)仔鼠糖代謝的影響(1)兩組仔鼠不同時(shí)期FBS、FINS水平的比較6w齡時(shí)空腹血糖和胰島素