妊娠期DEHP暴露對小鼠胎盤生長與發(fā)育的影響.pdf

1、目的：
　　鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯（Di-(2-ethylhexyl)phthalate，DEHP）作為一種增塑劑被廣泛使用且存在于環(huán)境中，由于DEHP與塑料制品之間不能共價結(jié)合，且隨著產(chǎn)品的反復(fù)使用、加熱及清洗，其可通過呼吸道、消化道及皮膚等途徑進入機體，對動物和人類生殖系統(tǒng)造成危害。已有研究顯示，妊娠期DEHP暴露，可導(dǎo)致子宮內(nèi)膜接受性明顯下降、妊娠率降低、流產(chǎn)率升高以及胎兒體重減輕等現(xiàn)象。然而，這些是否與妊娠期間DEH

2、P暴露導(dǎo)致胎盤的生長發(fā)育障礙密切相關(guān)呢？至目前為止，還未見相關(guān)的研究。本項目擬通過強制性灌胃方法，在體觀察圍植入期DEHP暴露對妊娠小鼠胎盤生長和發(fā)育的影響。
　　方法：
　　從妊娠第1天起，通過體外強制性灌胃方法給予不同劑量的DEHP（125、250、500 mg/kg/day），于妊娠第9天（GD9）和13天（GD13）取子宮、胚胎及胎盤標(biāo)本。通過HE染色觀察DEHP暴露對胎盤組織結(jié)構(gòu)的影響；通過免疫組織化學(xué)方法觀察DE

3、HP暴露對胎盤增殖和迷路層血管發(fā)育的影響；通過實時定量PCR分析DEHP暴露對胎盤標(biāo)志性基因表達水平的影響；Western blot方法分析DEHP暴露對胎盤凋亡及相關(guān)的信號通路的影響。
　　結(jié)果：
　?。?）在GD9，與對照組相比，不同劑量DEHP處理對胚胎的重量以及胚胎與體重的比值，均無明顯影響（P>0.05）。然而，在GD13，隨著DEHP濃度的增加，胚胎加胎盤的重量以及其與體重的比值均顯著性降低（P<0.05或0.0

4、1）；胎盤的重量及其與體重的比值均低于對照組（P<0.01）。
　?。?）在GD9，DEHP的暴露明顯抑制了外胎盤錐的生長和發(fā)育。在GD13，與對照組相比，DEHP的暴露明顯降低胎盤總面積及海綿層細(xì)胞的面積（P<0.05或0.01）。
　?。?）在GD9、GD13，與對照組相比，DEHP暴露均明顯抑制胎盤中Ascl2、Esx1 mRNA的表達水平（P<0.05或0.01）。在GD9，DEHP處理組Fosl1 mRNA的表達水

5、平與對照組之間無顯著性差異（P>0.05）。然而，在GD13，與對照組相比，DEHP暴露均明顯抑制胎盤中Fosl1 mRNA的表達水平（P<0.01），增加Eomes、Hand1 mRNA的表達水平（P<0.05或0.01）。
　?。?）在GD13，與對照組相比，DEHP暴露可明顯抑制小鼠胎盤迷路層血管的形成。
　?。?）免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，在GD9、GD13，與對照組相比，外胎盤錐、胎盤迷路層及海綿層的Ki67陽性細(xì)胞均

6、明顯下降（P<0.05或0.01）。
　?。?）在GD13，與對照組相比，DEHP處理組胎盤 Bax、Caspase-3和Caspase-8 mRNA表達水平均顯著性升高，Bcl-2 mRNA表達水平顯著降低（P<0.05或0.01）。然而，在GD9，DEHP處理組與對照組之間沒有顯著性的差異（P>0.05）。免疫印跡結(jié)果顯示，在GD9、GD13，與對照組相比，DEHP處理組Caspase-3和Caspase-8均被激活。在GD1

7、3，DEHP處理組Bax蛋白表達水平明顯升高，而Bcl-2蛋白水平明顯下降（P<0.01）。
　　（7） Western blot檢測顯示，在GD9，與對照組相比，250 mg/kg/day和500 mg/kg/day的DEHP處理明顯增加Erk1/2磷酸化水平（P<0.01）。在GD13，Erk1/2磷酸化水平隨著DEHP濃度的增加而顯著性增加（P<0.05或0.01）。
　　結(jié)論：
　?。?）妊娠期間DEHP暴露可