成人眼IPE與RPE細(xì)胞體外培養(yǎng)及其PEDF、VEGF表達(dá)研究.pdf

1、1.成人眼IPE與RPE細(xì)胞體外分離、培養(yǎng)與鑒定目的:體外分離培養(yǎng)成人眼IPE與RPE細(xì)胞,觀察其形態(tài)、結(jié)構(gòu)及生長(zhǎng)情況.方法:以酶輔助顯微分離-酶消化法分離IPE細(xì)胞并培養(yǎng),以酶消化法分離RPE細(xì)胞并培養(yǎng),倒置相差顯微鏡觀察原代與傳代細(xì)胞生長(zhǎng)情況,描記生長(zhǎng)曲線,以鼠抗人角蛋白抗體對(duì)培養(yǎng)的IPE與RPE細(xì)胞進(jìn)行免疫學(xué)鑒定,透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu).結(jié)果:體外成功培養(yǎng)出IPE與RPE細(xì)胞,兩者角蛋白抗體染色均為陽(yáng)性.原代細(xì)胞均含色素顆粒,隨

2、傳代次數(shù)增加色素逐漸減少甚至消失.細(xì)胞伸展后均呈多角形或梭性,傳代細(xì)胞伸展更加明顯.兩種細(xì)胞生長(zhǎng)曲線接近.透射電鏡顯示均具有正常細(xì)胞器結(jié)構(gòu).結(jié)論:利用酶輔助顯微分離-酶消化法與酶消化法分別獲得了大量高純度的成人眼IPE與RPE細(xì)胞,兩者在體外培養(yǎng)條件下形態(tài)、結(jié)構(gòu)以及生長(zhǎng)情況相似,為進(jìn)一步研究?jī)烧吖δ芴峁┝藢?shí)驗(yàn)基礎(chǔ).2.PEDF、VEGF在成人眼IPE與RPE細(xì)胞表達(dá)測(cè)定目的:測(cè)定并比較PEDF與VEGF在成人眼IPE與RPE細(xì)胞中表達(dá)情

3、況.方法:利用Trizol一步法提取生長(zhǎng)近融合傳二代IPE與RPE細(xì)胞總RNA,對(duì)其PEDF、VEGF mRNA表達(dá)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè),同時(shí)以酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)測(cè)定兩種培養(yǎng)細(xì)胞上清液中PEDF含量.結(jié)果:體外培養(yǎng)的成人眼IPE與RPE細(xì)胞均表達(dá)PEDF和VEGF mRNA,IPE細(xì)胞的PEDF和VEGF mRNA含量均低于RPE細(xì)胞,IPE細(xì)胞上清液中PEDF含量也明顯低于RPE細(xì)胞上清液.差異有統(tǒng)計(jì)