葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1RNA在肺癌診斷中的應(yīng)用研究.pdf

1、目的：
　　 胸水是肺部疾病或肺癌的常見并發(fā)體癥，也是查找病因，鑒別其良惡性的重要媒介。本課題以免疫化學(xué)SP法在細(xì)胞水平上檢測(cè)GLUT1表達(dá)差異，同時(shí)采用雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法Real-time RT-PCR定量檢測(cè)肺癌患者胸水中GLUT1mRNA含量，其意為癌細(xì)胞在脫落胸腔內(nèi)早期階段、甚至尚未脫落至胸腔而建立國(guó)內(nèi)肺癌早期診斷方法。
　　 方法：
　　 研究用150例標(biāo)本來自2011年3月至2012年2月湖南省人民醫(yī)院及湖

2、南省腫瘤醫(yī)院患者胸水細(xì)胞。病例標(biāo)本分為對(duì)照組和肺部疾病患者組，后者又分為肺部炎癥、良性腫瘤和肺癌組。其檢測(cè)標(biāo)本離體后經(jīng)2500r/min離心10min后分為兩部分：一部分將沉淀細(xì)胞制成石蠟切片用于HE常規(guī)染色和SP免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測(cè)胸水細(xì)胞中的GLUT1蛋白表達(dá)；另一剩余的沉淀細(xì)胞置-70℃冰箱保存，采用雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法Real-time RT-PCR技術(shù)對(duì)GLUT1 mRNA進(jìn)行定量檢測(cè)。
　　 結(jié)果：
　　 1)G

3、LUT1蛋白在對(duì)照組、肺良性病變組和肺癌組三組中的總體表達(dá)有差異(Hc=45.197，P<0.05)。兩兩比較顯示：對(duì)照組和肺良性病變組兩組間比較，GLUT1表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=1.893，P>0.05)；GLUT1在肺癌組表達(dá)明顯高于對(duì)照組和肺良性病變組(x2=6.090，4.817，均P<0.001)。
　　 2)GLUT1蛋白在肺癌70例中，其中Ⅲ-Ⅳ期中的表達(dá)強(qiáng)度高于I-Ⅱ期、低-中分化組高于高分化組、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)

4、移組高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(均P<0.05)。
　　 3)Real-time RT-PCR雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法檢測(cè)GLUT1 mRNA歸一化值分別為：對(duì)照組：0.0014+0.0199、肺良性病組：0.0119+0.0240、肺癌組：0.3889±0.4598。GLUT1mRNA在對(duì)照組、肺良性病變組和肺癌組三組中的表達(dá)總體差異非常顯著(Hc=69.848，P<0.01)。兩兩比較顯示：GLUT1 mRNA在肺癌組表達(dá)明顯高于對(duì)照組和肺良性

5、病變組(x2=7.559，6.008均P<0.001)；但對(duì)照組和肺良性病變組GLUT1 mRNA表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=2.325，P>0.05)。
　　 4)GLUT1 mRNA在不同類型疾病組間比較：肺癌Ⅲ-Ⅳ期中的表達(dá)強(qiáng)度高于I-Ⅱ期、低-中分化組高于高分化組、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(均P<0.05)。
　　 5)ROC曲線結(jié)果顯示：在ROC曲線確定診斷閾值為0.0056的條件下，計(jì)算RT-PCR的G

6、LUT1 mRNA與SP免疫組化檢測(cè)GLUT1下面積，分別為0.880和0.791，顯示GLUT1 mRNA診斷價(jià)值優(yōu)于SP法GLUT1檢測(cè)。
　　 結(jié)論：
　　 1)胸水中GLUT1與肺癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，對(duì)肺癌臨床鑒別診斷及預(yù)后有臨床參考價(jià)值。
　　 2)建立了雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法Real-time PCR檢測(cè)胸水中GLUT1mRNA的方法，可作為早期檢測(cè)肺癌的新方法。
　　 3)GLUT1 mRNA對(duì)肺癌早期