Hrd-1與Derlin-1在胃癌中表達(dá)及對(duì)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白GLUT-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的:探討葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白GLUT-1及E3泛素連接酶Hrd-1、逆轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Derlin-1在胃癌中的表達(dá)及意義，及三者之間的相互關(guān)系，并進(jìn)一步探究胃癌中Hrd-1及Derlin-1對(duì)于GLUT-1的調(diào)控機(jī)制。
　　方法:應(yīng)用免疫組化及免疫印跡方法檢測(cè)人類(lèi)胃癌組織和癌旁組織中GLUT-1、Hrd-1、Derlin-1的表達(dá)差異。在人類(lèi)胃癌SGC-7901細(xì)胞中分別過(guò)表達(dá)Derlin-1與GLUT-1、RNAi技術(shù)沉默Derlin-1

2、，并應(yīng)用免疫熒光及免疫印跡法檢測(cè)蛋白表達(dá)水平變化;MTT法檢測(cè)Derlin-1表達(dá)情況對(duì)于SGC-7901細(xì)胞增殖的影響;使用免疫共沉淀技術(shù)檢測(cè)Derlin-1與GLUT-1結(jié)合情況。
　　結(jié)果:
　　1.免疫組化及免疫印跡法發(fā)現(xiàn)胃癌組織中GLUT-1、Hrd-1、Derlin-1蛋白表達(dá)水平均高于癌旁組織;GLUT-1主要表達(dá)于細(xì)胞膜上及部分胞質(zhì)內(nèi)，與胃癌的大小及病理分型相關(guān);Derlin-1及Hrd-1主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中

3、，Derlin-1表達(dá)與胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān);GLUT-1在胃癌的表達(dá)水平與Hrd-1及Derlin-1的表達(dá)水平負(fù)相關(guān)。
　　2.使用RNAi技術(shù)敲降Derlin-1在人胃癌細(xì)胞SGC-7901中的表達(dá)，MTT結(jié)果顯示，siRNA介導(dǎo)的Derlin-1表達(dá)下調(diào)對(duì)SGC-7901細(xì)胞的增殖無(wú)明顯影響;同時(shí)過(guò)表達(dá)SGC-7901細(xì)胞中的Derlin-1對(duì)其增殖亦未見(jiàn)明顯影響。
　　3.在SGC-7901細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染EGFP-m

4、yc-GLUT-1質(zhì)粒和pcDNA3.1-Derlin-1及單獨(dú)轉(zhuǎn)染EGFP-myc-GLUT-1質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染48小時(shí)后提取細(xì)胞裂解上清液，進(jìn)行免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)，用anti-myc抗體免疫沉淀Derlin-1，隨后使用免疫印跡法檢測(cè)免疫沉淀物發(fā)現(xiàn)共轉(zhuǎn)染組和單獨(dú)轉(zhuǎn)染組均有Derlin-1蛋白條帶顯示，證明GLUT-1和Derlin-1蛋白存在著相互結(jié)合作用。
　　4.在人類(lèi)胃癌細(xì)胞SGC-7901內(nèi)共轉(zhuǎn)染EGFP-myc-GLUT-1和

5、pcDNA3.1-Derlin-1以及EGFP-myc-GLUT-1和pSilencer-Derlin-1重組載體，同時(shí)使用了單獨(dú)轉(zhuǎn)染EGFP-myc-GLUT-1的以及EGFP-myc-GLUT-1分別與該兩種重組載體對(duì)應(yīng)的空白載體共轉(zhuǎn)染的人類(lèi)胃癌細(xì)胞SGC-7901作為對(duì)照，轉(zhuǎn)染48小時(shí)轉(zhuǎn)染EGFP-myc-GLUT-1和pcDNA3.1-Derlin-1組與共轉(zhuǎn)染EGFP-myc-GLUT-1和對(duì)應(yīng)空載載體組比較，Derlin-1

6、表達(dá)明顯增高，而GLUT-1表達(dá)隨之降低;共轉(zhuǎn)染EGFP-myc-GLUT-1和pSilencer-Derlin-1重組載體組與共轉(zhuǎn)染EGFP-myc-GLUT-1和對(duì)應(yīng)空載載體組比較，Derlin-1表達(dá)明顯降低，而GLUT-1表達(dá)隨之增高;共轉(zhuǎn)染EGFP-myc-GLUT-1和兩種空載質(zhì)粒的兩組與單獨(dú)轉(zhuǎn)染EGFP-myc-GLUT-1組未見(jiàn)GLUT-1與Derlin-1表達(dá)有明顯差異。
　　結(jié)論:GLUT-1、Derlin-1