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1、目的：椎間盤(pán)組織是人體內(nèi)最大的無(wú)血管組織，由髓核和纖維環(huán)構(gòu)成，二者長(zhǎng)期處于低氧環(huán)境。目前研究表明，隨著年齡的增長(zhǎng)椎間盤(pán)組織出現(xiàn)的基質(zhì)成分的改變。本研究觀(guān)察不同月齡大鼠椎間盤(pán)纖維環(huán)中HIF—1α和GLUT—1含量變化，進(jìn)一步探討兩者與椎間盤(pán)退變的關(guān)系。 方法：⑴以質(zhì)量濃度為25g/L戊巴比妥那腹腔過(guò)量麻醉處死大鼠，取相同節(jié)段腰椎間盤(pán)(L4—L5)。每例椎間盤(pán)組織分為2份(分別用于免疫組化染色及Westernblot)。一份標(biāo)本室溫
2、下在體積分?jǐn)?shù)0.1的甲醛溶液中固定4d，VonEbner法脫鈣2周。常規(guī)石蠟包埋后切成4μm厚的切片。將獲得的另一份標(biāo)本在顯微鏡下分離為髓核與纖維環(huán)，迅速置于液氮中，轉(zhuǎn)入—80℃冰箱中備用。⑵免疫組織化學(xué)法(SABC法)檢測(cè)HIF—1α、GLUT—1的表達(dá)情況。⑶Westernblot免疫印跡法檢測(cè)HIF—1α、GLUT—1的蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果：隨著大鼠月齡的增長(zhǎng)，其椎間盤(pán)纖維環(huán)組織中HIF—1α和GLUT—1的表達(dá)也發(fā)生變
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