29416.葡萄糖轉(zhuǎn)運載體glut1、glut2和glut3在粟酒裂殖酵母中的表達及glut家族進化分析

1、重慶大學(xué)博士學(xué)位論文葡萄糖轉(zhuǎn)運載體GLUT1、GLUT2和GLUT3在粟酒裂殖酵母中的表達及GLUT家族進化分析姓名：楊妤欣申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：生物制藥指導(dǎo)教師：陳國平20090615重慶大學(xué)博士學(xué)位論文4不同培養(yǎng)條件下，膜結(jié)合膜蛋白表達差異與一部分涉及膜蛋白分泌途徑的宿主基因差異表達相關(guān)。另外，本實驗采用GSTpulldown技術(shù)，驗證GLUTl與3一磷酸甘油醛脫氫酶(glyceraldehyde3phosphatedehydro

2、genase，GAPDH)的相互作用。SDSPAGE和WB結(jié)果均提示表達的GLUTl能與GAPDH在體外相互作用，說明在裂殖酵母中異源表達的GLUTl具有部分生物學(xué)活性。獲得高效的膜蛋白的抗體一直是一個難題。目前大部分的膜蛋白抗體都是利用多肽片段免疫動物得到，并不適用于所有的實驗研究。本實驗利用純化的GLUTl蛋白免疫Balb／e小鼠生產(chǎn)了多克隆抗體。經(jīng)SDSPAGE和WB實驗證明該抗體為勻質(zhì)的、特異性高的抗GLUTl小鼠多抗。我們相信

3、這個抗體將在后續(xù)的對GLUTl的研究中發(fā)揮重要的作用。最后我們對GLUT蛋白家族進行了進化分析。我們通過從多種原生動物，真菌，無脊椎動物和脊椎動物中基因組中分離出GLUT家族成員，構(gòu)建了它們的進化樹，分析了GLUT家族的進化歷史。結(jié)果表明GLUT家族的最重大的分化發(fā)生在無脊椎動物和脊椎動物分化之后，魚類和陸生脊椎動物分化之前。非同義突變與同義突變的比值(Ka／Ks)表明哺乳動物的GLUT非常的相似，功能區(qū)非常保守，但魚類和哺乳類GLUT

4、差異較大，從另一方面佐證了GLUT在魚類和陸生脊椎動物類的發(fā)生了較大的分化。另外我們還單獨分析了GLUTl的進化樹，通過生物信息學(xué)工具對GLUTl在三維結(jié)構(gòu)上的保守區(qū)進行了分析，結(jié)果表明GLUTl的保守區(qū)和非保守區(qū)在每個跨膜區(qū)中是交替出現(xiàn)的。GLUTl家族在其蛋白質(zhì)序列上有58個最保守的氨基酸位點，其中包含了一些實驗已經(jīng)驗證的GLUTl的重要功能位點。在GLUTl中，除已經(jīng)驗證QLS和QLG這兩個重要的模序外，我們還發(fā)現(xiàn)了另外新的一個非