炎立消結(jié)腸定位包衣片的制備和作用機(jī)理研究.pdf

1、口服結(jié)腸靶向給藥系統(tǒng)最近十多年來受到廣泛重視,它可用于結(jié)腸局部病變的治療,在蛋白、多膚類藥物的口服給藥上也具有廣闊的應(yīng)用前景。近年來潰瘍性結(jié)腸炎(UC)發(fā)病率呈上升趨勢(shì),已被世界衛(wèi)生組織列為現(xiàn)代難治疾病之一,有關(guān)其病因、發(fā)病機(jī)理、治療藥物的研究一直是該領(lǐng)域研究的熱點(diǎn),引起了國內(nèi)外醫(yī)藥學(xué)研究人士的廣泛關(guān)注。與西藥相比,中醫(yī)藥具有辨證靈活,療效顯著,毒副作用少,復(fù)發(fā)率低等優(yōu)點(diǎn),但劑型的落后又嚴(yán)重制約了中藥治療優(yōu)勢(shì)的充分發(fā)揮。因此,進(jìn)行中藥口

2、服結(jié)腸靶向給藥系統(tǒng)的研究就顯得尤為重要。 丁香葉為木樨科植物紫丁香(syringa oblata lindl.)、洋丁香(syringavulgaris L.)和朝鮮丁香(syringa diatata Nakai)的干燥葉,在東北和華北地區(qū)分布廣泛,資源豐富,是著名的觀賞和園藝植物。丁香葉味苦性寒,民間將其作為傳統(tǒng)中草藥,主要用于抗菌消炎、保肝利膽等。近年來,我國的科研工作者對(duì)丁香葉的藥理研究做了大量的工作,發(fā)現(xiàn)丁香葉具有廣譜

3、抗菌和抗病毒作用,并己收載于《黑龍江省藥品標(biāo)準(zhǔn)》。丁香葉制劑炎立消膠囊、片劑收載于《中華人民共和國部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)》,主要用于治療急性腸炎、上呼吸道感染、黃疸性肝炎、菌痢等感染性疾病,療效顯著,副作用小,基礎(chǔ)研究較為深入。雖然丁香葉是治療炎性腸病的有效藥物,但普通制劑口服后藥物成分易在胃腸道上部吸收,因此需制備成結(jié)腸靶向釋藥系統(tǒng),以提高有效成分在結(jié)腸局部病灶的治療濃度,減少全身吸收帶來的副作用。 本文選用丁香葉有效部位作為模型藥物,

4、采用丙烯酸樹脂水分散體為包衣材料,制備口服結(jié)腸靶向給藥系統(tǒng),治療慢性潰瘍性結(jié)腸炎。本文以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo),采用化學(xué)有效成分和藥理活性雙重指標(biāo)研究丁香葉有效部位提取工藝,建立檢測(cè)內(nèi)在質(zhì)量的定量方法,研究制備了pH依賴-時(shí)間控釋型結(jié)腸定位包衣片,使藥物在結(jié)腸段精確釋放。 采用AB-8大孔吸附樹脂對(duì)丁香葉中丁香苦苷類成分進(jìn)行提取精制,以丁香苦苷為考察指標(biāo),建立HPLC分析方法,考察了影響指標(biāo)性成分提取率的工藝因素。丁香葉經(jīng)水提取,70

5、％乙醇沉淀,以AB-8型大孔樹脂為吸附劑,4BV的水洗脫除去雜質(zhì)后,收集5BV的50％乙醇洗脫液為最佳工藝條件。該方法對(duì)有效成分的保留率高,且原材料和能耗低,經(jīng)濟(jì)實(shí)用。大孔吸附樹脂分離工藝可作為富集丁香苦苷類成分的有效方法,為丁香葉藥材的質(zhì)量控制和新型給藥系統(tǒng)的研究奠定基礎(chǔ)。本研究采用2,4,6,-三硝基苯磺酸建立大鼠潰瘍性結(jié)腸炎(UC)模型,通過HE染色觀察結(jié)腸病理改變的變化情況,用原位末端標(biāo)記檢測(cè)結(jié)腸粘膜細(xì)胞凋亡,用免疫組化法檢測(cè)結(jié)

6、腸粘膜Fas,Bcl-2,Bax,Caspase-3和核轉(zhuǎn)錄因子NF-kBp65的蛋白表達(dá)；采用β-actin作為管家基因,繪制了該基因定量PCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線,建立了實(shí)時(shí)定量PCR的方法來檢測(cè)目的基因Fas,Bcl-2,Caspase-3和核轉(zhuǎn)錄因子NF-κBp65的表達(dá)水平,研究丁香葉有效部位對(duì)UC的治療作用的分子生物學(xué)機(jī)制,特別是通過觀察它們對(duì)UC大鼠細(xì)胞凋亡相關(guān)信號(hào)途徑的影響,為揭示中藥治療潰瘍性結(jié)腸炎的基本規(guī)律提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依

7、據(jù),為臨床用藥提供理論指導(dǎo)。 采用滾轉(zhuǎn)包衣機(jī)多層薄膜包衣技術(shù)制備結(jié)腸定位包衣片,以羥丙甲纖維素HPMC作為隔離層,pH敏感型丙烯酸樹脂Eudragit L30D-55與Eudragit S100混合包衣液作為腸溶層,滲透型丙烯酸樹脂Eudragit RL30D和EudragitRS30D混合液作為緩釋層,以檸檬酸三乙酯作為增塑劑,滑石粉作為抗粘劑,通過正交實(shí)驗(yàn)進(jìn)行處方優(yōu)化,研究包衣片在模擬人體胃腸道環(huán)境中的釋藥速率。結(jié)果表明,最

8、佳包衣處方：隔離層增重1.2％；腸溶層組成Eudragit L30D-55:S100(1:5),包衣增重5％：緩釋層組成(1:1.5),包衣增重2％。包衣片在0.1moL·L-1鹽酸溶液中2小時(shí)無藥物釋放,在pH6.8的磷酸鹽緩沖液中3小時(shí)藥物釋放低于10％,在pH7.5的磷酸鹽緩沖液中呈緩慢釋放,12小時(shí)內(nèi)藥物釋放量在70％左右,累積釋藥百分率達(dá)到標(biāo)示量的80％以上。 為了進(jìn)行家兔體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究,建立了簡單、快速、靈敏的血

9、漿中丁香苦苷濃度HPLC檢測(cè)方法。丁香苦苷濃度在0.524～52.4μg·mL-1范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。以未包衣片芯為對(duì)照,研究4只健康家兔口服PH依賴-時(shí)間控釋型結(jié)腸定位包衣片的藥物動(dòng)力學(xué)。結(jié)果表明,結(jié)腸定位包衣片的體內(nèi)吸收顯著低于未包衣片芯(P<0.01),PH依賴-時(shí)間控釋型結(jié)腸定位包衣片和未包衣片芯的丁香苦苷AUC0-36分別為75.306 mg/L-1h和202.383 mg/L-1h,二者間不具生物等效性。時(shí)間控釋小丸的