MIF-ERK信號通路對免疫復(fù)合物誘導(dǎo)腎系膜細胞增殖的影響.pdf

1、目的： 1、觀察免疫復(fù)合物對體外培養(yǎng)大鼠腎系膜細胞增殖的影響。 2、觀察免疫復(fù)合物對MIF/ERK信號傳導(dǎo)通路的影響。 3、探討MIF/ERK信號傳導(dǎo)通路在免疫復(fù)合物誘導(dǎo)腎系膜細胞增殖中的作用。 方法： 1、體外培養(yǎng)大鼠腎系膜細胞。 2、用不同濃度的可溶性聚合IgG(AIgG，一種標準的免疫復(fù)合物模型，刺激濃度分別為0μg/ml、250μg/ml、500μg/ml)刺激腎系膜細胞24小時后

2、，采用SYBR Green Real-time PCR及Western-blot技術(shù)檢測Cyclin-D1 mRNA及蛋白表達的變化. 3、采用流式細胞術(shù)分析免疫復(fù)合物對腎系膜細胞增殖的影響。 4、采用SYBR Green Real-time PCR及RT-PCR技術(shù)分析免疫復(fù)合物刺激腎系膜細胞后MIF-mRNA表達的變化；采用Western-blot及細胞免疫熒光技術(shù)IF分析MIF蛋白表達的變化及MIF表達的部位。

3、 5、采用 Western-blot檢測免疫復(fù)合物刺激腎系膜細胞后總ERK1/2、磷酸化ERK1/2表達的變化。 6、用ERK1/2阻斷劑PD98059(50μM)抑制ERK1/2信號傳導(dǎo)通路后，采用Western-blot觀察總ERK1/2、磷酸化ERK1/2及Cyclin-D1表達的變化。 結(jié)果： 1、AIgG刺激體外培養(yǎng)大鼠腎系膜細胞后，Real-time PCR及Western-blot結(jié)果提示調(diào)控細

4、胞增殖周期的Cyclin-D1 mRNA及蛋白表達合成增加。 2、流式細胞術(shù)結(jié)果提示AIgG刺激體外培養(yǎng)大鼠腎系膜細胞后，進入S期細胞的百分比增加，即進入增殖期的細胞數(shù)增多。 3、AIgG刺激體外培養(yǎng)大鼠腎系膜細胞后，Real-time PCR及RT-PCR結(jié)果均提示MIF-mRNA表達增加。Western-blot及IF結(jié)果提示腎系膜細胞MIF蛋白表達合成增加，且MIF表達合成主要位于腎系膜細胞的胞漿。 4、A

5、IgG刺激體外培養(yǎng)大鼠腎系膜細胞后，總ERK1/2表達無明顯變化，而磷酸化ERK1/2表達顯著增加。即免疫復(fù)合物刺激腎系膜細胞后，通過ERK磷酸化方式激活ERK信號傳導(dǎo)通路。 5、當(dāng)用PD98059阻斷ERK1/2信號傳導(dǎo)通路后，總ERK1/2表達無明顯變化，而磷酸化ERK1/2表達顯著受抑制；同時調(diào)控細胞增殖的Cyclin-D1表達合成也明顯減少。即ERK1/2信號傳導(dǎo)通路通過影響Cyclin-D1的表達合成來調(diào)控細胞的增殖。