中藥組方NDRF聯(lián)合MTX對AA家兔MMP-3、VEGF分子及mRNA的影響.pdf

1、目的:佐劑性關(guān)節(jié)炎(AA)家兔用中藥NDRF、甲氨蝶呤(MTX)分別和聯(lián)合給藥，檢測用藥后家兔滑膜組織中MMP-3、VEGF細胞因子及其相應基因的變化，目的是探討中藥NDRF組方及聯(lián)合用藥的治療作用，為中藥及中西醫(yī)聯(lián)合治療類風濕關(guān)節(jié)炎提供指導。
　　 方法:(1)以弗氏完全佐劑聯(lián)合TNF-α改良誘導注射家兔，制備AA家兔模型。(2)觀察家兔活動、進食情況等一般情況和關(guān)節(jié)腫脹情況，測量膝關(guān)節(jié)周徑的變化。(3)采用ELISA法檢測家

2、兔滑膜組織中MMP-3、VEGF細胞因子的水平。(4)采用RT-qPCR法檢測家兔滑膜組織MMP-3 mRNA、VEGF mRNA的水平。
　　 結(jié)果:(1)家兔致敏前后膝關(guān)節(jié)周徑變化:右膝關(guān)節(jié)周徑注射前9.50cm，第1周后增加至13.25cm，與注射前比，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05):左膝關(guān)節(jié)周徑注射前9.52cm，第3周增加至12.08cm，與注射前對比，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，關(guān)節(jié)炎指數(shù)大于6。
　　

3、 (2)家兔滑膜組織MMP-3、VEGF細胞因子檢測結(jié)果:與正常對照組比較，模型對照組家兔滑膜組織MMP-3、VEGF細胞因子為13.39(μg/L)、212.00(ng/L)比正常對照組5.91(μg/L)、99.79(ng/L)均明顯增高，有極顯著性差異(P＜0.01);與模型對照組比較，中藥NDRF組家兔滑膜組織MMP-3、VEGF細胞因子含量7.66(μμg/L)、105.35(ng/L)、中藥NDRF+MTX聯(lián)合組5.97(

4、μμg/L)、85.20(ng/L)比模型對照組均明顯降低，有極顯著性差異(P＜0.01)，西藥MTX組家兔滑膜組織MMP-3、VEGF細胞因子含量為11.84(μμg/L)、174.95(ng/L)比模型對照組降低，有顯著性差異(P＜0.05):與西藥MTX組比較，中藥NDRF組、中藥NDRF+MTX聯(lián)合組家兔滑膜組織MMP-3、VEGF細胞因子含量均低于西藥MTX組，有極顯著性差異(P＜0.01);中藥NDRF+MTX聯(lián)合組與中藥N

5、DRF組比較，聯(lián)合組家兔滑膜組織MMP-3、VEGF細胞因子含量均低于中藥NDRF組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05，P＜0.01)。
　　 (3) MMP-3mRNA與VEGF mRNA相對定量統(tǒng)計分析結(jié)果:與正常對照組比較，模型對照組MMP-3 mRNA(2-(△△ct))、VEGF mRNA(2-(△△ct))為2.448、3.050明顯高于正常對照組，有極顯著性差異(P＜0.01);與模型對照組比較，中藥NDRF組0.

6、249、1.062，中藥NDRF+MTX聯(lián)合組0.088、0.549比模型對照組均明顯降低，有極顯著性差異(P＜0.01)，西藥MTX組0.847、2.489，與模型對照組比較有降低，有顯著性差異(P＜0.01，P＜0.05);與西藥MTX組比較，中藥NDRF組、中藥NDRF+MTX聯(lián)合組家兔滑膜組織MMP-3、VEGFmRNA相對表達量均低于西藥MTX組，有極顯著性差異(P＜0.01);中藥NDRF+MTX聯(lián)合組與中藥NDRF組比較，

7、聯(lián)合組家兔滑膜組織MMP-3、VEGFmRNA相對表達量均低于中藥NDRF組，有極顯著性差異(P＜0.01)。
　　 (4) AA家兔滑膜組織MMP-3的含量與滑膜MMP-3mRNA表達水平有密切的相關(guān)性，且存在顯著正相關(guān)(r=0.655，P＜0.01)。
　　 (5) AA家兔滑膜組織VEGF的含量與滑膜VEGFmRNA表達水平有密切的相關(guān)性，且存在顯著正相關(guān)(r=0.905，P＜O.O1)。
　　 結(jié)論:(1

8、)本實驗以弗氏完全佐劑聯(lián)合TNF-α改良誘導注射家兔，制備AA家兔模型，家兔致敏前后膝關(guān)節(jié)周徑變化明顯，關(guān)節(jié)指數(shù)大于6，表明AA模型成功。
　　 (2)中藥組方NDRF及聯(lián)合MTX可降低AA家兔滑膜組織中MMP-3、VEGF細胞因子的水平;中藥組方NDRF及聯(lián)合MTX可降低AA家兔滑膜組織MMP-3mRNA、VEGFmRNA的水平。通過下調(diào)MMP-3、VEGF水平，更好地抑制致炎效應。
　　 (3)本研究初步提示中藥組方