百合種質(zhì)離體保存技術(shù)研究.pdf

1、限制生長保存和超低溫保存是植物種質(zhì)離體保存的兩種主要方法。限制生長保存是在保證植物種質(zhì)遺傳完整性的前提下限制試管苗的生長，減少繼代次數(shù)，達(dá)到中期保存植物種質(zhì)資源的目的。超低溫保存是使植物材料在超低溫條件下處于代謝活動(dòng)停滯狀態(tài)，是植物種質(zhì)長期保存的理想方法。本研究以切花百合‘西伯利亞’和野生百合卷丹為實(shí)驗(yàn)材料，研究了探討百合種質(zhì)資源限制生長法保存和超低溫保存的主要影響因素及指標(biāo)，以及離體保存后再生植株的遺傳穩(wěn)定性，以期為實(shí)現(xiàn)百合種質(zhì)資源的

2、中長期保存提供科學(xué)理論和實(shí)踐依據(jù)。主要研究結(jié)果如下： 1通過研究不同培養(yǎng)基成分配比、滲透性化合物(高濃度蔗糖、甘露醇)濃度和生長抑制劑(ABA、CCC)濃度對百合試管苗保存效果的影響，初步建立了百合種質(zhì)限制生長離體保存較理想方法：以鱗莖、莖段、花絲為外植體誘導(dǎo)不定芽的產(chǎn)生，并繼代至MS+BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L培養(yǎng)基上生長。在MS或者大量微量元素均減半的1/2MS培養(yǎng)基中添加1.0～3.0mg/L的ABA能夠有效

3、延長繼代間隔時(shí)間，離體保存百合試管苗長達(dá)9個(gè)月以上，存活率均在80％以上。培養(yǎng)基中加入50～90g/L高濃度蔗糖能夠保存百合試管苗11個(gè)月以上。而10～50g/L甘露醇和10～40mg/LCCC對百合試管苗生長沒有起到明顯的限制作用。 2以百合試管苗莖尖分生組織為材料，對玻璃化法超低溫保存技術(shù)進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究，并通過正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)對影響超低溫保存存活率的主要影響因素(預(yù)培養(yǎng)基中蔗糖濃度、預(yù)培養(yǎng)時(shí)間和PVS2處理時(shí)間)進(jìn)行了分析，初步

4、建立了百合種質(zhì)超低溫保存的最佳技術(shù)方法：即選用繼代45～60d左右的試管苗置于4℃低溫鍛煉一周以上，在無菌條件下剝?nèi)в腥~原基的莖尖分生組織(直徑約1～2mm)，在添加了0.1～0.3mol/L蔗糖的液體培養(yǎng)基中預(yù)培養(yǎng)1～2d，然后用MS+0.4mol/L蔗糖+2mol/L甘油溶液裝載20min，0℃下用冰凍保護(hù)劑PVS2處理60～120min。將材料裝入冷凍管中，加入新鮮的PVS2冰凍保護(hù)劑，直接投入液氮保存。凍存后的材料在40℃水浴

5、化凍，用MS+1.2mol/L蔗糖溶液洗滌10min，轉(zhuǎn)移至MS+0.5mg/LBA+0.1mg/LNAA+0.3mg/LGA3+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂的再生培養(yǎng)基中常溫下暗培養(yǎng)2周，之后轉(zhuǎn)移至正常光照下培養(yǎng)。其存活率可達(dá)到50％以上。 3采用包埋干燥法超低溫保存百合莖尖分生組織，并對影響存活率的各主要因素進(jìn)行了正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)及分析。該方法最佳的保存技術(shù)還有待于進(jìn)一步探索。 4對離體保存后存活的材料進(jìn)行再生培養(yǎng)，通過