晚熟荔枝種質資源的RAPD分析及其離體保存研究.pdf

1、荔枝(Litchi chinensis Sonn.)在我國至少有2000多年的栽培歷史，荔枝按照成熟期分為早、中、晚熟品種，在長期的人工栽培與自然選擇過程中形成了種類繁多的品種與類型，通過引種，各地的晚熟荔枝種質資源在不斷地得到利用，晚熟荔枝的優(yōu)良遺傳基因圖譜是荔枝遺傳改良的物質基礎。鑒于此，我們對收集于福建福清市等地的30份荔枝晚熟種質資源，采用RAPD技術進行遺傳多樣性分析，確立晚熟荔枝的核心種質；在此基礎上，采用花藥培養(yǎng)誘導的胚性

2、愈傷組織進行限制生長保存研究，并分離了荔枝胚性愈傷組織GRX基因，為進一步研究離體保存奠定基礎。主要研究結果如下：
　　 1、晚熟荔枝種質資源的RAPD分析
　　 本試驗采用RAPD技術對30個晚熟荔枝品種進行遺傳多樣性分析。研究結果表明:19條隨機引物共產生277條RAPD帶，其中255條為多態(tài)性帶，多態(tài)性百分率為92.06％。根據(jù)RAPD分析結果，對供試的30個晚熟荔枝品種采用Jaccard方法進行聚類分析，結果表明

3、：它們之間的遺傳相似系數(shù)在0.427-0.942之間，平均相似系數(shù)為0.625，在D1=19.0處，將30個晚熟荔枝品種分為2大類；在D2=15.0處將其分為6個亞組：在D3=5.0處，可將其劃分為24個小組，同一原產地的荔枝品種基本可以劃分在一類，也有不在同一類的，說明親緣關系比較遠而且與其他品種存在一定的變異。綜合考慮核心種質以最小的資源數(shù)量、遺傳差異大等因素，初步確定晚熟荔枝元紅、下番枝、海墾4號、鵝蛋荔、紫荔、秀石荔、江口荔、牛

4、心荔、牛心荔(變種)、大丁香、南島無核荔、春藤蜜荔、紅繡球、東莞無核荔、玉融晚荔、馬貴荔、實生樹、玫瑰香荔、立秋荔、瓊A13號共20個品種為核心種質。
　　 2、晚熟荔枝花藥培養(yǎng)誘導胚性愈傷組織及其限制生長保存研究
　　 采用花藥培養(yǎng)從20個晚熟荔枝核心種質誘導胚性愈傷組織。結果表明：不同品種的誘導率不同，誘導率均值在1.7050-63.3233％之間；不同的培養(yǎng)基對同一品種花藥愈傷組織的誘導率不同。確定離體保存最佳培養(yǎng)

5、基，元紅:1/4MS+1.0mg·L-12,4-D+25g·L-1甘露醇+25mg·L-1PP333+0.4g·L-1甜菜堿；海墾4號:1/2MS+1.0mg·L-12,4-D+20g·L-甘露醇+25mg·L-1PP333+0.1g·L-1甜菜堿，均附加20g·L-1蔗糖，7g·L-1瓊脂，pH5.8，25±1℃，暗培養(yǎng)，可將晚熟荔枝胚性愈傷組織的繼代周期延長至140d。
　　 3、晚熟荔枝胚性愈傷組織GRX基因的克隆及其生物

6、信息學分析
　　 本研究應用同源克隆與RACE結合，以晚熟荔枝下番枝胚性愈傷組織為材料獲得抗性基因GRX的cDNA全長，序列全長697bp，5＇UTR為81bp，3＇UTR為217bp，區(qū)域還含有典型的加尾信號AATAA及3＇端還含有23個poly(A)，該序列與登錄GenBank的其它植物GRX基因有較高的同源性，拼接的序列含有一個366個堿基的開放閱讀框，編碼132個氨基酸，以ATG為起始密碼子、TGA為終止密碼子。在Gen

7、Bank上已登錄，登錄號：GU250736;并對GRX基因編碼的氨基酸序列進行生物信息學分析，結果表明：谷氧還蛋白相對分子量為14.6067kDa，等電點pI6.41;屬于親水性蛋白，存在跨膜結構域，亞細胞定位在線粒體外膜的可能最大為0.850，具有信號肽屬于分泌性蛋白的可能性達99.9％。對GRX保守結構域及功能域進行分析，晚熟荔枝胚性愈傷組織GRX具有一個活性中心CPYC的氨基酸基序。通過功能預測與分析，為推測GRX基因在離體保存過