福建龍眼種質(zhì)資源離體保存初步研究.pdf

1、本試驗以福建龍眼(DimocarpuslonganLour.)的主要栽培品種、地方品種及特異株系的幼胚為外植體，誘導(dǎo)胚性愈傷組織，作為龍眼種質(zhì)資源離體保存的材料。試驗中采用限制生長法對延長龍眼胚性愈傷組織繼代周期進(jìn)行一系列的比較，并研究了繼代過程中龍眼胚性愈傷組織生理狀態(tài)的變化規(guī)律；最后，采用染色體數(shù)目及RAPD分子標(biāo)記檢測對保存的龍眼胚性胚傷組織進(jìn)行遺傳穩(wěn)定性分析。主要研究結(jié)果如下： 1.建立了51份龍眼松散型胚性愈傷組織(F

2、riableembryogeniccallus，F(xiàn)EC)。試驗結(jié)果表明，MS+2.0mg·L-12,4-D可以適用不同龍眼幼胚類型(直徑大小)及品種的愈傷組織的誘導(dǎo)，平均誘導(dǎo)率為48.3％，誘導(dǎo)率的差異主要由胚的直徑大小(生理成熟度)決定。幼胚直徑在2-4mm范圍內(nèi)最適宜用于胚性愈傷組織誘導(dǎo)，可直接在MS+2.0mg·L-12,4-D培養(yǎng)基上誘導(dǎo)FEC；幼胚直徑大于4mm或者小2mm的龍眼幼胚易在MS+2.0mg·L-12,4-D培養(yǎng)基

3、上產(chǎn)生褐變，通過添加0.2％活性炭短期培養(yǎng)(1周左右)有助于抑制褐變，提高胚性愈傷組織誘導(dǎo)率。在小于2mm，4-6mm，大于6mm的3類型幼胚中，采用活性炭短期培養(yǎng)再轉(zhuǎn)移至MS+2.0mg·L-12,4-D培養(yǎng)基都可以誘導(dǎo)出胚性愈傷組織。 2.龍眼胚性愈傷組織的限制生長保存及其TTC活性、SOD酶活性及MDA含量變化分析。試驗發(fā)現(xiàn)，不同品種的龍眼胚性愈傷組織在繼代過程中，衰老時間有較大差異，如油潭本、十二月龍眼等較早出現(xiàn)褐變衰老

4、，東壁、烏龍嶺則表現(xiàn)為可以耐受更長的繼代時間；在MS+1.0mg·L-12,4-D+2％甘露醇培養(yǎng)基，可使龍眼胚性愈傷組織的繼代周期從20d延長到35-40d，再結(jié)合16℃低溫，可使繼代周期延長到60d；在胚性愈傷組織繼代保存過程中，TTC活性、SOD酶活性及MDA含量變化規(guī)律表現(xiàn)為：TTC活性在繼代過程中隨繼代時間的延長而逐步下降，通過在培養(yǎng)基中添加甘露醇進(jìn)行限制生長培養(yǎng)，可減小單位時間內(nèi)的下降幅度；SOD酶活性在胚性愈傷組織出現(xiàn)褐變

5、衰老時增高，而后隨繼代時間的延長而逐步下降；MDA含量變化與胚性愈傷組織的褐變衰老相關(guān)，在常規(guī)繼代培養(yǎng)中，MDA含量隨繼代時間的延長而增長，但在低溫等限制生長條件下，MDA含量能維持在較低水平。 3.龍眼胚性胚傷組織進(jìn)行遺傳穩(wěn)定性的染色體數(shù)目及RAPD分子標(biāo)記檢測。研究發(fā)現(xiàn)，龍眼胚性愈傷組織的染色體數(shù)目變異從愈傷組織誘導(dǎo)階段就存在，變異率隨著繼代時間的延長而有所累積，但長期保存有趨于穩(wěn)定的趨勢。龍眼胚性愈傷組織染色體數(shù)目的變異類