補(bǔ)腎化瘀解毒方配合西藥治療慢性再生障礙性貧血的機(jī)理及臨床研究.pdf

1、本文對(duì)補(bǔ)腎化瘀解毒方配合西藥治療慢性再生障礙性貧血的機(jī)理及臨床價(jià)值進(jìn)行了研究，全文分為兩部分： 第一部分，臨床研究目的：研究中藥復(fù)方補(bǔ)腎化瘀解毒方對(duì)慢性再生障礙性貧血的患者外周血象影響，觀察其臨床療效，以驗(yàn)證脾腎兩虛為本，血瘀、熱毒為標(biāo)的病機(jī)理論，并以此而立法組方的可行性和實(shí)用性。 研究方法：采用臨床對(duì)照法。納入標(biāo)準(zhǔn)為具有再障的臨床癥狀，血象及骨髓象符合慢性再生障礙性貧血的實(shí)驗(yàn)室檢查(診斷標(biāo)準(zhǔn)參照1987年全國(guó)第四屆再生

2、障礙性貧血修訂的慢性再生障礙性貧血的診斷標(biāo)準(zhǔn))。將所選病例，隨機(jī)分為中西醫(yī)結(jié)合治療組42例，西藥治療對(duì)照組29例。兩組一般情況無(wú)差異性。對(duì)照組服用康力龍、一葉秋堿。治療組在對(duì)照組用藥基礎(chǔ)上加用補(bǔ)腎化瘀解毒方(補(bǔ)骨脂、肉蓯蓉、熟地黃、菟絲子、黃芪、黨參、白術(shù)、山藥、當(dāng)歸、丹參、玄參等)。兩組均3個(gè)月為一療程。病程中出現(xiàn)感染及嚴(yán)重出血時(shí)，給抗菌素、輸血和止血藥對(duì)癥處理，此外不用其它藥物，兩組所用藥物基本相似。觀察指標(biāo)：①臨床癥狀改變。建立病

3、例、隨訪專(zhuān)卡，分別記錄治療前后頭暈乏力、面色蒼白、心悸氣短、腰酸乏力、皮膚瘀斑或瘀點(diǎn)，舌、脈等內(nèi)容。②血象改變。治療前由專(zhuān)業(yè)檢驗(yàn)師采血取標(biāo)本，根據(jù)血紅蛋白量分為輕、中、重度貧血，治療末進(jìn)行復(fù)查，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)參照1987年全國(guó)第四屆再生障礙性貧血修訂的慢性再生障礙性貧血的療效標(biāo)準(zhǔn)。分基本治愈、緩解、明顯進(jìn)步、無(wú)效。 研究結(jié)果：①血象改變。治療組與對(duì)照組比較，血紅蛋白含量于第1療程、第2療程后，均有顯著差異(P＜0.

4、05)。白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)在第1療程后，均無(wú)明顯差異(P＞0.05)，而在第2療程后兩組比較均有明顯差異(P＜0.05和P＜0.01)。②兩組臨床療效。治療組治療后總有效率88.1％，對(duì)照組總有效率72.41％。兩組比較P＜0.05，治療組顯著優(yōu)于對(duì)照組。 研究結(jié)論：本研究表明，中藥復(fù)方補(bǔ)腎化瘀解毒方配合西藥治療慢性再生障礙性貧血能改善臨床癥狀，增加慢性再生障礙性貧血患者的血紅蛋白含量，提高白細(xì)胞、血小板計(jì)數(shù)。其療效優(yōu)于西藥

5、對(duì)照組。觀察結(jié)果，從臨床療效角度，證實(shí)了脾腎兩虛為本，血瘀、熱毒為標(biāo)的病機(jī)理論和以此理論立法組方的補(bǔ)腎化瘀解毒方治療慢性再生障礙性貧血的可行性和實(shí)用性。且該方毒副作用小，是治療慢性再障的有效藥物，值得進(jìn)一步研究開(kāi)發(fā)。 第二部分，實(shí)驗(yàn)研究目的：觀察補(bǔ)腎化瘀解毒方對(duì)再生障礙性貧血小鼠造血細(xì)胞的影響及免疫介導(dǎo)再生障礙性貧血小鼠免疫功能的影響，以探討補(bǔ)腎化瘀解毒方治療再生障礙性貧血的作用機(jī)理。 研究方法： 1.補(bǔ)腎化瘀解

6、毒方對(duì)再生障礙性貧血模型小鼠造血細(xì)胞的影響。選用12周齡昆明種小鼠(♀)60只，隨機(jī)分為5組，正常對(duì)照組(簡(jiǎn)稱(chēng)正常組)、再障模型組(簡(jiǎn)稱(chēng)模型組)、康力龍對(duì)照組(簡(jiǎn)稱(chēng)康力龍組)、補(bǔ)腎化瘀解毒方高劑量治療組(簡(jiǎn)稱(chēng)高劑量組)、補(bǔ)腎化瘀解毒方低劑量治療組(簡(jiǎn)稱(chēng)低劑量組)。除正常組外，其它各組小鼠采用腹腔注射馬利蘭15mg/kg，每周一次，連續(xù)10周。造模成功后，高劑量組給補(bǔ)腎化瘀解毒方40g/kg.d(相當(dāng)于臨床用量的20倍)，低劑量組給補(bǔ)腎化

7、瘀解毒方20g/kg.d(相當(dāng)于臨床用量的10倍)，康力龍組給康力龍4mg/kg.d，正常組、模型組予等量蒸餾水灌胃，每日一次，連續(xù)20天。給藥結(jié)束后禁食不禁水12小時(shí)，尾靜脈取血，計(jì)數(shù)紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板，測(cè)血紅蛋白含量，同時(shí)，涂片染色后，計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞，觀察補(bǔ)腎化瘀解毒方對(duì)再障小鼠外周血的影響。然后斷頸處死，取小鼠右側(cè)股骨，用冰醋酸沖出骨髓細(xì)胞并計(jì)數(shù)，觀察補(bǔ)腎化瘀解毒方對(duì)再障小鼠骨髓細(xì)胞的影響。 2.補(bǔ)腎化瘀解毒方對(duì)免疫介

8、導(dǎo)再生障礙性貧血模型小鼠免疫功能的影響。選用8-12周齡Balb/c小鼠40只(♀♂各半)，隨機(jī)分為4組，正常組、模型組、補(bǔ)腎化瘀解毒方高劑量治療組(簡(jiǎn)稱(chēng)高劑量組)、補(bǔ)腎化瘀解毒方低劑量治療組(簡(jiǎn)稱(chēng)低劑量組)。用8-10周齡DBA/2小鼠6只，作為細(xì)胞供體。取DBA/2小鼠，斷頸處死，75％酒精浸泡消毒，無(wú)菌取出胸腺及頸部、腋下、腹股溝等處的淋巴結(jié)，放入1640培養(yǎng)液，除去表面血污及結(jié)締組織，再次清洗后，用剪刀反復(fù)剪切組織成糊狀，輕輕研

9、磨，用200目尼龍網(wǎng)過(guò)濾，使之成為單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后配成1×106/ml濃度，取苔盼藍(lán)1滴滴入玻片上鑒定細(xì)胞活性在95％以上。將模型組、高劑量組、低劑量組的Balb/c小鼠經(jīng)X射線6.0Gy/3min量照射后，1～4小時(shí)內(nèi)尾靜脈注入上述細(xì)胞懸液，每只0.2ml，免疫介導(dǎo)再障模型成功。高劑量組給補(bǔ)腎化瘀解毒方40g/kg.d，(相當(dāng)于臨床用量的20倍)，低劑量組給補(bǔ)腎化瘀解毒方20g/kg.d，(相當(dāng)于臨床用量的10倍)，正常組、模型組予

10、等量蒸餾水灌胃，每日一次，連續(xù)20天。給藥結(jié)束后禁食不禁水12小時(shí)，尾靜脈取血，觀察補(bǔ)腎化瘀解毒方對(duì)免疫介導(dǎo)再障小鼠外周血的影響。用放射免疫法檢測(cè)小鼠血清IL-2、TNF的水平。采用細(xì)胞毒法檢測(cè)小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞百分比率。以觀察補(bǔ)腎化瘀解毒方對(duì)免疫介導(dǎo)再障模型小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。 研究結(jié)果： 1.補(bǔ)腎化瘀解毒方對(duì)再障小鼠外周血的影響，結(jié)果顯示：模型組小鼠RBC、WBC、Hb、Plt、RET計(jì)數(shù)較正常組有明顯降低(P＜0.

11、05)；給予康力龍和補(bǔ)腎化瘀解毒方治療后，WBC、RBC、Hb、Plt、RET均較模型組有升高，除低劑量組Hb無(wú)顯著升高外(P＞0.05)，其它均有顯著升高(P＜0.05)；高劑量組WBC、RBC升高與康力龍組比較差異無(wú)顯著性(P＞0.05)，Hb、Plt、RET與康力龍組比較有顯著升高(P＜0.05)；低劑量組WBC、RBC、Plt升高明顯低于康力龍組(P＜0.05)，而低劑量組Hb、RET與康力龍組比較兩組接近，差異無(wú)顯著性(P＞0

12、.05)；高劑量組與低劑量組比較WBC、RBC、Hb、Plt、RET各項(xiàng)指標(biāo)均有顯著升高(P＜0.05)。說(shuō)明補(bǔ)腎化瘀解毒方有升高再障小鼠外周血各項(xiàng)指標(biāo)的功能，且作用優(yōu)于康力龍，尤以高劑量組效果更佳。 2.補(bǔ)腎化瘀解毒方對(duì)再障模型小鼠骨髓有核細(xì)胞(MNC)計(jì)數(shù)的影響。結(jié)果顯示：再障模型小鼠MNC較正常組小鼠有明顯減少(P＜0.05)；康力龍組、補(bǔ)腎化瘀解毒方治療組與模型組比較MNC有顯著升高(P＜0.05)，其中高劑量治療組MN

13、C的升高與康力龍組比較無(wú)明顯差異(P＞0.05)；低劑量治療組MNC升高明顯低于康力龍組(P＜0.05)；高劑量組MNC升高明顯優(yōu)于低劑量組(P＜0.05)。說(shuō)明補(bǔ)腎化瘀解毒方有修復(fù)骨髓造血細(xì)胞損傷的作用，并促進(jìn)其增殖、分化。且高劑量效果顯著。 3.補(bǔ)腎化瘀解毒方對(duì)免疫介導(dǎo)再障模型小鼠血清IL-2、TNF水平的影響，結(jié)果顯示：模型小鼠與正常小鼠比較IL-2、TNF含量有顯著升高(P＜0.01)。應(yīng)用補(bǔ)腎化瘀解毒方治療后，高、低劑

14、量組IL-2、TNF水平較模型組均有明顯降低(P＜0.01)；高、低劑量組間比較，IL-2含量以高劑量組下降更顯著(P＜0.01)，而TNF含量組間無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。說(shuō)明補(bǔ)腎化瘀解毒方可通過(guò)抑制IL-2、TNF的表達(dá)起到免疫調(diào)節(jié)作用，并可解除其對(duì)骨髓造血的抑制作用。 4.補(bǔ)腎化瘀解毒方對(duì)免疫介導(dǎo)再障模型小鼠T細(xì)胞亞群的影響，結(jié)果顯示：模型組與正常組比較，TH細(xì)胞(輔助性T細(xì)胞、CD4)有顯著降低(P＜0.01)，Ts

15、細(xì)胞(抑制性T細(xì)胞、CD8)有明顯升高(P＜0.01)，TH/Ts比值明顯降低(P＜0.01)；高劑量組與模型組比較，TH細(xì)胞有顯著升高(P＜0.01)，Ts細(xì)胞有顯著降低(P＜0.01)，TH/Ts比值明顯升高(P＜0.01)；低劑量組與模型組比較TH細(xì)胞有升高的趨勢(shì)，但無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，Ts細(xì)胞有顯著降低(P＜0.01)，TH/Ts比值明顯升高(P＜0.01)；高劑量與低劑量組間比較，TH有顯著升高(P＜0.01)，Ts

16、有顯著降低(P＜0.01)，TH/Ts比值明顯升高(P＜0.01)。表明補(bǔ)腎化瘀解毒方有調(diào)節(jié)T細(xì)胞亞群平衡的作用，通過(guò)降低Ts細(xì)胞水平，升高TH細(xì)胞，調(diào)節(jié)TH/Ts比值，解除其對(duì)造血細(xì)胞功能的抑制作用，且以高劑量組效果更佳。 研究結(jié)論：本研究結(jié)果證實(shí)補(bǔ)腎化瘀解毒方對(duì)再障模型小鼠有治療作用，與臨床研究結(jié)果一致。表明補(bǔ)腎化瘀解毒方能升高再障模型小鼠外周血各項(xiàng)指標(biāo)的數(shù)值，增加骨髓有核細(xì)胞數(shù)，具有促進(jìn)骨髓造血干細(xì)胞的修復(fù)、增殖作用，這可