乳腺導管擴張癥的細菌學研究.pdf

1、研究背景
　　 乳腺導管擴張癥目前發(fā)病率上升，約占乳腺良性疾病的5％，而且該病病情遷延不愈，許多患者在經歷多次手術復發(fā)之后不得不選擇切除乳房以達到治愈。但是該病的病因尚不明確，自發(fā)現(xiàn)該病以來，國內外學者提出了諸多假說:內源性或外源性原因造成乳管引流不暢，分泌物淤積，導致無菌性炎癥發(fā)生;也有學者認為該病與激素失衡有關;較近的文獻則考慮該病與本病與細菌感染（尤其是厭氧菌、分枝桿菌感染），吸煙有關。
　　 有學者發(fā)表論文應用經

2、典抗結核藥物（異煙肼，利福平，乙胺丁醇等）治療乳腺導管擴張癥，取得了良好治療效果。該學者率先使用抗癆藥物治療本病是因為參考了2002年中華醫(yī)學會結核分會制定的有關肺外NTM（非結核分枝桿菌）病的診斷標準:對于軟組織感染且形成長期不愈竇道的病灶，臨床上可診斷非結核分枝桿菌感染。所以他推斷該病也可能是由于非結核分枝桿菌感染所致。雖然藥物試驗足以證明該抗癆治療有效，但是遺憾的是王祈教授一直未能檢測或培養(yǎng)出結核桿菌或非結核分枝桿菌。
　　

3、 堅持乳腺導管擴張癥是由細菌感染所致的專家中主要以Dixon教授為代表，他堅持認為細菌感染是導致導管擴張癥的重要因素，之后不斷有學者對導管擴張癥患者的切除組織進行細菌學培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)主要致病為腸球菌，厭氧鏈球菌，金葡菌等;然而也有學者發(fā)表未能培養(yǎng)出細菌的文章，這不得不讓人們思考乳腺導管擴張癥與細菌感染到底有沒有關系，是什么因果關系。
　　 實驗目的
　　 本研究擬使用分支桿菌培養(yǎng)、實時熒光定量PCR的方法檢分枝桿菌屬，并使

4、用16srDNA通用引物PCR擴增后測序經過序列對比驗證細菌，以進一步明確乳腺導管擴張癥的細菌學病因。
　　 對象與方法
　　 (1)結核桿菌檢測實驗組:選擇2010年8月-10月于我院治療新發(fā)5例導管擴張癥膿腫期患者。于手術室無菌環(huán)境下切開皮膚，收集膿液，每例患者收集3管，共收集樣本15管。
　　 16srDNA引物實驗組:按照同樣方法收集2007.2-2011.10期間，于我院進行治療的乳腺導管擴張癥11例患

5、者的組織或者膿液。連同分支桿菌實驗組的5例患者的備用標本合并為16例標本進行16srDNA引物PCR實驗組。
　　 (2)從我科乳腺纖維腺瘤患者數(shù)據(jù)庫篩選出不伴有導管擴張癥的患者，與研究組16例患者按照年齡（±2歲）、就診時間（±1年）情況按1∶3進行配對，作為對照組。所有數(shù)據(jù)分析應用SPSS16.0統(tǒng)計學軟件完成。
　　 (3)分支桿菌培養(yǎng)實驗組:對標本進行預處理后接種于分支桿菌培養(yǎng)基，進行每周3次、為期8周的觀察。<

6、br>　　 分支桿菌PCR實驗組:經過DNA提取、擴增后置于Lightcycler480PCR儀進行實時熒光PCR檢測。
　　 16srDNA引物PCR實驗組:設計細菌16srDNA通用引物，對PCR體系(25ul)進行瓊脂糖凝膠電泳后進行高通量測序，將測得序列與Blast系統(tǒng)比對，以明確細菌類型。
　　 結果
　　 (1)本次研究應用的分支桿菌培養(yǎng)及實時熒光定量PCR方法檢測分支桿菌結果均為陰性，初步斷定5位

7、患者的膿液及組織標本中不含分枝桿菌屬細菌或者含有細菌量較少，低于兩種方法檢測閾值，故未出現(xiàn)陽性結果。
　　 (2)16srDNA引物PCR實驗組每組細菌均出現(xiàn)陽性結果，測序序列經過Blast系統(tǒng)比對后分別為假單胞菌50％（其中銅綠假單胞菌31.25％，未培養(yǎng)假單胞菌12.5％，耳炎假單胞菌6.25％），葡萄球菌6.25％，芽孢八疊球菌6.25％，堅硬芽孢桿菌6.25％，屎腸球菌6.25％，宏基因組文庫的細菌25％。