核酸酶Onconase抗腫瘤研究.pdf

1、腫瘤一直是危害人類健康的一大疾病,目前我們還沒有非常有效的治療腫瘤的方法,一些用于治療腫瘤的藥物由于免疫源性強,毒副作用大而效果不理想.尋找高效的抗腫瘤藥物一直是抗腫瘤研究的熱點.廣泛存在于機體內的核酸酶是一類序列保守,結構穩(wěn)定,以RNA為底物的蛋白.它們具有的抗腫瘤特性引起了大家的興趣,特別是由于它們和機體內源性蛋白相似、分子量小,作為抗腫瘤藥物,它們具有免疫源性弱、毒副作用小等優(yōu)點.九十年代在兩棲類蛙卵(Rana pipiens)內

2、發(fā)現(xiàn)的核酸酶-Onconase的抗腫瘤效果目前在核酸酶家族中是最好的,在體內外試驗中,Onconase對一系列腫瘤都有明顯的治療效果,作為抗腫瘤藥物有很大的潛力.我們的研究主要是提高Onconase的抗腫瘤特異性,希望構造出特異性抗腫瘤藥物.我們根據大腸桿菌密碼子偏好性,合成編碼Oncoanse的基因,將Onconase基因通過MscI和SalI酶切位點克隆在pET22b(+)表達載體上,在大腸桿菌BL21(DE3)中以包涵體的形式大量

3、表達重組Onconase.通過包涵體復性,純化過程最終獲得與天然蛋白有一致酶活和腫瘤細胞毒性的重組Onconase.在體外細胞水平上研究重組Onconase對淋巴瘤細胞Hut-78、K562的毒性,并在此基礎上,用化學偶聯(lián)試劑SPDP將重組Onconase和轉鐵蛋白用二硫鍵偶聯(lián),研究偶聯(lián)后蛋白對高表達轉鐵蛋白受體的K562細胞的特異性.我們的研究證明了構建基于Onconase的特異性抗腫瘤蛋白的可行性,為以后開發(fā)Onconase的特異性