2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、研究背景:
   血-視網(wǎng)膜屏障(blood-retinal barrier,BRB)包括由視網(wǎng)膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞及其緊密連接構(gòu)成的內(nèi)屏障,和由視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞及其緊密連接構(gòu)成的外屏障。正常情況下視網(wǎng)膜內(nèi)屏障可阻止血管內(nèi)液體和大分子物質(zhì)滲漏到視網(wǎng)膜;外屏障則阻止脈絡(luò)膜毛細(xì)血管血液滲漏到視網(wǎng)膜。各種原因,如缺血、糖代謝異常、炎性細(xì)胞因子的釋放、玻璃體以及視網(wǎng)膜前膜的機(jī)械牽引等都可以造成血-視網(wǎng)膜屏障的破壞,血管內(nèi)液體及大分子物質(zhì)

2、滲漏到細(xì)胞外間隙,形成視網(wǎng)膜水腫,發(fā)生于黃斑區(qū)的水腫稱為黃斑水腫。黃斑水腫直接引起患者視力下降,如果長(zhǎng)期得不到緩解,可造成視網(wǎng)膜組織不可逆性損傷終致失明。因此,黃斑水腫的早期治療十分重要。
   黃斑水腫目前常用的治療方法包括:①激光治療,一定程度上緩解黃斑水腫,但對(duì)于彌漫性黃斑水腫患者則療效欠佳,甚至部分患者在治療后黃斑水腫加重;②玻璃體內(nèi)注射糖皮質(zhì)激素(如曲安奈德triamcinolone acetonide,TA)、抗血管

3、內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)抗體(如雷珠單抗)等取得了較好療效,但藥物半衰期短,需反復(fù)多次注射,增加了玻璃體內(nèi)感染的幾率,以及眼內(nèi)壓升高和白內(nèi)障發(fā)生的幾率(發(fā)生幾率高達(dá)30%-50%)。
   研究表明,由occludin、claudin-5、與zonula occludens-1等蛋白構(gòu)成的細(xì)胞間緊密連接是維持血-視網(wǎng)膜屏障生理功能的重要保障。糖皮質(zhì)激素在體內(nèi)外

4、能與糖皮質(zhì)激素受體結(jié)合,促進(jìn)細(xì)胞間緊密連接蛋白的表達(dá)進(jìn)而降低受損血-視網(wǎng)膜屏障的通透性,這可能是糖皮質(zhì)激素治療黃斑水腫的機(jī)制之一。
   七葉皂苷是中藥娑羅子的主要成分,具有穩(wěn)定血管內(nèi)皮細(xì)胞、保護(hù)血腦屏障和增加靜脈張力等作用,臨床常用于治療創(chuàng)傷及各種手術(shù)后水腫、視網(wǎng)膜靜脈阻塞以及中心性滲出性脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎等。前期研究顯示,七葉皂苷可上調(diào)糖皮質(zhì)激素受體的表達(dá),抑制炎癥相關(guān)因子,在抗炎作用方面與糖皮質(zhì)激素具有顯著協(xié)同效應(yīng),但無(wú)免疫抑

5、制作用。由此我們推測(cè),七葉皂苷有可能通過(guò)提高糖皮質(zhì)激素受體的表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)糖皮質(zhì)激素對(duì)血-視網(wǎng)膜屏障的保護(hù)作用(協(xié)同保護(hù)作用)。如果假設(shè)成立,可為黃斑水腫的治療提供新的思路,降低糖皮質(zhì)激素的使用劑量,減少其產(chǎn)生的不良反應(yīng)。
   研究目的:
   基于玻璃體內(nèi)注射糖皮質(zhì)激素治療黃斑水腫易導(dǎo)致眼內(nèi)感染、白內(nèi)障及眼內(nèi)壓升高等的現(xiàn)狀,本研究擬探討七葉皂苷(escin)與曲安奈德聯(lián)合應(yīng)用對(duì)血-視網(wǎng)膜屏障損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制,為

6、降低糖皮質(zhì)激素的使用劑量、減少其不良反應(yīng)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
   研究方法:
   本研究分為兩部分:第一部分為體內(nèi)實(shí)驗(yàn),研究七葉皂苷與曲安奈德聯(lián)合應(yīng)用對(duì)急性高眼壓導(dǎo)致的大鼠血-視網(wǎng)膜屏障損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制;第二部分為體外實(shí)驗(yàn),研究七葉皂苷與曲安奈德聯(lián)合應(yīng)用對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(humanumbilical vein endothelial cells,HUVECs)及視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞-19(retinalpigment

7、 epithelium cells-19,ARPE-19)緊密連接的影響及其機(jī)制。
   1.七葉皂苷與曲安奈德聯(lián)合應(yīng)用對(duì)急性高眼壓導(dǎo)致的大鼠血-視網(wǎng)膜屏障損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。
   首先通過(guò)大鼠眼前房灌注乳酸鈉林格氏液升高眼內(nèi)壓制備缺血-再灌注模型造成血-視網(wǎng)膜屏障損傷。然后將模型大鼠隨機(jī)分為模型組、七葉皂苷小劑量組(0.9 mg/kg)、七葉皂苷大劑量組(1.8 mg/kg)、曲安奈德小劑量組(2μl,40mg/

8、ml)、曲安奈德大劑量組(5μl,40 mg/ml)以及小劑量七葉皂苷和曲安奈德聯(lián)合用藥組,外加一假手術(shù)組作為對(duì)照。造模結(jié)束后立即給藥,其中七葉皂苷尾靜脈注射給藥,曲安奈德玻璃體內(nèi)注射給藥。假手術(shù)組大鼠麻醉后,僅眼前房插針注入乳酸鈉林格氏液維持正常眼壓,維持時(shí)間與大鼠急性高眼壓模型前后總時(shí)間一致,不做藥物治療。給藥后24 h,隨機(jī)取6只大鼠6只眼睛,用尾靜脈注射伊文思藍(lán)(45 mg/kg)的方法定量檢測(cè)藥物對(duì)血-視網(wǎng)膜屏障通透性的影響,

9、同時(shí)取鼠眼,甲醛固定,H-E染色,用Metamorph/BX51圖像分析軟件測(cè)量視網(wǎng)膜厚度。
   進(jìn)一步通過(guò)免疫組化及Western blot技術(shù)檢測(cè)七葉皂苷與曲安奈德合用對(duì)血-視網(wǎng)膜屏障損傷大鼠緊密連接蛋白o(hù)ccludin表達(dá)的影響。
   2.七葉皂苷與曲安奈德聯(lián)合應(yīng)用對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞和視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞-19緊密連接的影響及其機(jī)制。
   首先在Transwell24孔培養(yǎng)板接種人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞和視網(wǎng)膜

10、色素上皮細(xì)胞-19,用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng),通過(guò)細(xì)胞電阻儀定期檢測(cè)電阻,判斷細(xì)胞間緊密連接的形成情況。細(xì)胞緊密連接建立后,加入重組人VEGF2μl(終濃度:視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞-1910 ng/ml;人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞100 ng/ml)破壞緊密連接,同時(shí)分別給予七葉皂苷(終濃度0.1、1、10μg/ml)、曲安奈德(0.01、0.1、1μmol/L)以及七葉皂苷(0.1μg/ml)+曲安奈德(0.01μmol/L),每個(gè)濃

11、度設(shè)3個(gè)平行孔,另設(shè)3孔(不加VEGF和藥物)作為空白對(duì)照,再另設(shè)3孔(只加VEGF不加藥物)作模型對(duì)照孔。加藥完成后,振蕩混勻,置于CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),分別在不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)電阻,判斷藥物對(duì)細(xì)胞間緊密連接的影響。
   進(jìn)一步在體外細(xì)胞屏障模型,通過(guò)Western blot技術(shù)檢測(cè)七葉皂苷與曲安奈德合用對(duì)細(xì)胞緊密連接蛋白o(hù)ccludin、zonula occludens-1(ZO-1)以及糖皮質(zhì)激素受體表達(dá)的影響。
 

12、  研究結(jié)果:
   1.七葉皂苷與曲安奈德聯(lián)合應(yīng)用對(duì)急性高眼壓導(dǎo)致的大鼠血-視網(wǎng)膜屏障損傷的保護(hù)作用。
   與假手術(shù)組比較,模型組大鼠血-視網(wǎng)膜屏障通透性及視網(wǎng)膜厚度顯著增加(p<0.01)。與模型組比較,高劑量七葉皂苷(1.8 mg/kg)與曲安奈德(5μl)均能顯著抑制大鼠血-視網(wǎng)膜屏障通透性(p<0.05,p<0.01)及減輕視網(wǎng)膜厚度(均為p<0.05),而低劑量七葉皂苷(0.9 mg/kg)與曲安奈德(2

13、μl)對(duì)大鼠血-視網(wǎng)膜屏障通透性和厚度未見顯著影響(均為p>0.05)。
   進(jìn)一步將單用無(wú)顯著效果的七葉皂苷(0.9 mg/kg)與曲安奈德(2μl)聯(lián)合應(yīng)用,結(jié)果對(duì)模型大鼠血-視網(wǎng)膜屏障通透性及水腫視網(wǎng)膜厚度有顯著抑制作用(p<0.05),顯示出協(xié)同作用。
   2.七葉皂苷與曲安奈德聯(lián)合應(yīng)用對(duì)血-視網(wǎng)膜屏障損傷大鼠緊密連接蛋白o(hù)ccludin表達(dá)的影響。
   與假手術(shù)組比較,模型組大鼠視網(wǎng)膜occlud

14、in蛋白表達(dá)顯著減少(p<0.01)。與模型組比較,單獨(dú)使用七葉皂苷(0.9 mg/kg)與曲安奈德(2μl)對(duì)大鼠視網(wǎng)膜occludin蛋白表達(dá)未見顯著影響,將七葉皂苷(0.9 mg/kg)與曲安奈德(2μl)聯(lián)合應(yīng)用,免疫組化和Western blot結(jié)果顯示神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層occludin蛋白表達(dá)顯著增加(p<0.05),顯示出協(xié)同作用。
   3.七葉皂苷與曲安奈德聯(lián)合應(yīng)用對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞和視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞-19緊密連接

15、電阻的影響。
   與空白對(duì)照組比較,VEGF能顯著降低人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞和視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞-19緊密連接的電阻(p<0.05)。與模型對(duì)照組(VEGF)比較,七葉皂苷(1、10μg/ml)與曲安奈德(0.1、1μmol/L)均能顯著增加人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞和視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞-19緊密連接的電阻(p<0.05和p<0.01),而七葉皂苷(0.1μg/ml)與曲安奈德(0.01μmol/L)對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞和視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞-1

16、9緊密連接的電阻未見顯著影響。
   進(jìn)一步將單用無(wú)顯著效果的七葉皂苷(0.1μg/ml)與曲安奈德(0.01μmol/L)聯(lián)合應(yīng)用,結(jié)果顯示能顯著增大細(xì)胞緊密連接電阻(p<0.05),顯示出協(xié)同作用。
   4.七葉皂苷與曲安奈德聯(lián)合應(yīng)用對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接蛋白o(hù)ccludin、ZO-1表達(dá)的影響。
   與空白對(duì)照組比較,VEGF能顯著抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接蛋白的表達(dá)(p<0.05)。與模型對(duì)照組

17、(VEGF)比較,七葉皂苷(0.1μg/ml)與曲安奈德(0.01μmol/L)對(duì)細(xì)胞緊密連接蛋白表達(dá)未見顯著影響,但七葉皂苷(0.1μg/ml)與曲安奈德(0.01μmol/L)聯(lián)合應(yīng)用,結(jié)果能顯著提高人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接蛋白的表達(dá)(p<0.05),顯示出協(xié)同作用。
   5.七葉皂苷與曲安奈德聯(lián)合應(yīng)用對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞糖皮質(zhì)激素受體表達(dá)的影響。
   與模型對(duì)照組(VEGF)比較,七葉皂苷(0.1μg/ml)與曲

18、安奈德(0.01μmol/L)單獨(dú)用對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞糖皮質(zhì)激素受體蛋白表達(dá)未見顯著影響,但將七葉皂苷(0.1μg/ml)與曲安奈德(0.01μmol/L)聯(lián)合應(yīng)用,結(jié)果能顯著提高人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞糖皮質(zhì)激素受體蛋白的表達(dá)(p<0.05)。
   結(jié)論:
   1.在缺血再灌注引起的視網(wǎng)膜水腫大鼠,小劑量七葉皂苷與小劑量曲安奈德單獨(dú)使用對(duì)大鼠血-視網(wǎng)膜屏障通透性和水腫視網(wǎng)膜厚度沒有顯著影響;但當(dāng)二者聯(lián)合應(yīng)用時(shí)則對(duì)大鼠血-視

19、網(wǎng)膜屏障通透性有顯著抑制作用,顯示出明顯的協(xié)同作用。七葉皂苷可通過(guò)放大糖皮質(zhì)激素的生物效應(yīng)提示可減少糖皮質(zhì)激素的用量。
   2.七葉皂苷與曲安奈德聯(lián)合應(yīng)用對(duì)血-視網(wǎng)膜屏障損傷的保護(hù)具有協(xié)同作用,其機(jī)制與提高糖皮質(zhì)激素受體表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)緊密連接蛋白o(hù)ccludin、ZO-1表達(dá)有關(guān)。
   3.在大鼠高眼壓造成缺血再灌注模型,靜脈注射大劑量七葉皂苷能顯著抑制大鼠血-視網(wǎng)膜屏障通透性增加,減輕缺血導(dǎo)致的水腫視網(wǎng)膜厚度。在體

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