經(jīng)腹股溝管輸精管結(jié)扎對(duì)兔睪丸、附睪和輸精管的組織學(xué)影響.pdf

1、研究背景與目的： 輸精管結(jié)扎是一種安全、可靠的男性節(jié)育方法，已在全世界開(kāi)展30多年，實(shí)施了約1億例<'[1]>，在我國(guó)己實(shí)施近5千萬(wàn)例<'[2]>，但自上世紀(jì)90年代以來(lái)，我國(guó)男性絕育術(shù)開(kāi)展呈明顯下降趨勢(shì)<'[3]>。有兩個(gè)主要因素影響其開(kāi)展，一是并發(fā)癥，二是絕育的不可逆性。輸精管結(jié)扎的并發(fā)癥主要是陰囊血腫、附睪郁積、痛性精子肉芽腫等。不過(guò)，隨著顯微外科技術(shù)以及試管嬰兒技術(shù)的發(fā)展，人們?cè)絹?lái)越關(guān)心輸精管結(jié)扎對(duì)睪丸內(nèi)精子發(fā)生的影響，

2、精子的數(shù)量和精液的質(zhì)量直接關(guān)系到輸精管吻合術(shù)后生育能力的恢復(fù)和人工授精的成功率。 在既往研究中，我們采用經(jīng)陰囊進(jìn)行兔輸精管結(jié)扎的手術(shù)方式，無(wú)論開(kāi)放性還是閉合性輸精管結(jié)扎均引起了較大程度的精子發(fā)生損害<'[4,5]>。我們推測(cè)，輸精管結(jié)扎術(shù)后對(duì)精子發(fā)生的影響，可能與輸精管結(jié)扎的部位--結(jié)扎處離輸精管附睪端的距離以及結(jié)扎術(shù)局部的手術(shù)創(chuàng)傷有關(guān)。因此，本研究采用一種離輸精管附睪端較遠(yuǎn)因此對(duì)睪丸局部影響小的輸精管結(jié)扎術(shù)--經(jīng)腹股溝管輸精管

3、結(jié)扎術(shù)，通過(guò)與以前的經(jīng)陰囊輸精管結(jié)扎術(shù)進(jìn)行對(duì)比，探討這種手術(shù)方式是否可以減輕手術(shù)局部的創(chuàng)傷和術(shù)后早期(10天、3月)對(duì)精子發(fā)生等的影響。 方法： 1、實(shí)驗(yàn)方案： 實(shí)驗(yàn)1：正常雄性日本大耳白兔30只，4月齡，隨機(jī)分為3組：①對(duì)照組--不作任何處理。②經(jīng)腹股溝管單側(cè)閉合性輸精管結(jié)扎組(笪-單-閉)--經(jīng)腹正中線(xiàn)切口，打開(kāi)兩側(cè)腹股溝管，挑出輸精管，左側(cè)或右側(cè)(交替確定)輸精管結(jié)扎--切除一段輸精管并結(jié)扎兩側(cè)斷端；對(duì)側(cè)作

4、假手術(shù)(除沒(méi)剪斷并結(jié)扎輸精管外，其余步驟均同結(jié)扎側(cè))。③經(jīng)陰囊單側(cè)閉合性輸精管結(jié)扎組(囊-單-閉)--經(jīng)陰囊切口暴露睪丸、附睪、輸精管，左側(cè)或右側(cè)(交替確定)輸精管結(jié)扎--切除一段輸精管并結(jié)扎兩側(cè)斷端，近附睪端結(jié)扎處距離附睪尾約1cm；對(duì)側(cè)作假手術(shù)。術(shù)后10天取材：對(duì)照組的動(dòng)物選一側(cè)(左側(cè)或右側(cè)，交替確定)取材，其余組的動(dòng)物均取兩側(cè)的睪丸、附睪和輸精管。 實(shí)驗(yàn)2：6月齡正常雄性日本大耳白兔32只，隨機(jī)分為2組：①經(jīng)腹股溝管單側(cè)閉

5、合性輸精管結(jié)扎組(管-單-閉)--左側(cè)或右側(cè)(交替確定)結(jié)扎，對(duì)側(cè)假手術(shù)；②經(jīng)腹股溝管單側(cè)近端開(kāi)放性輸精管結(jié)扎組(管-單-開(kāi))--左側(cè)或右側(cè)(交替確定)結(jié)扎，對(duì)側(cè)假手術(shù)。笪-單-開(kāi)組的結(jié)扎術(shù)同管-單-閉組，但近附睪端輸精管斷端保持開(kāi)放，另一斷端的輸精管才結(jié)扎。術(shù)后10天從各組隨機(jī)抽選5只動(dòng)物取材，其余的動(dòng)物術(shù)后3月取材；取材包括雙側(cè)的睪丸、附睪和輸精管。 2．組織處理 取下的睪丸、附睪和輸精管用Bouin液浸潤(rùn)固定約48

6、小時(shí)，然后從睪丸、附睪和輸精管各隨機(jī)切取1～3個(gè)組織塊，用羥乙基甲基丙烯酸樹(shù)脂包埋，切25μm厚的樹(shù)脂切片，睪丸用PAS和蘇木精染色，附睪、輸精管用蘇木精染色。 3．觀察與測(cè)量 術(shù)后取材時(shí)肉眼觀察睪丸、附睪的形態(tài)及其與周?chē)M織的粘連情況；光鏡下觀察睪丸、附睪和輸精管的組織學(xué)結(jié)構(gòu)；用體視學(xué)方法測(cè)量睪丸內(nèi)生精小管的直徑和體積，附睪內(nèi)的附睪管和精子團(tuán)等的體積，輸精管內(nèi)精子團(tuán)等的體積分?jǐn)?shù)(比例)。 4．統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)

7、同組動(dòng)物結(jié)扎側(cè)與(對(duì)側(cè))假手術(shù)側(cè)的形態(tài)定量指標(biāo)的比較，采用配對(duì)f檢驗(yàn)，以P≤0.05表示有顯著性差異。 結(jié)果： 1．解剖觀察： 術(shù)后10天，管-單-閉或管-單-開(kāi)組的睪丸、附睪形態(tài)正常，與周?chē)M織無(wú)粘連，近附睪端輸精管結(jié)扎處或近附睪端輸精管斷口處距附睪尾約5～8cm。囊-單-閉組的睪丸、附睪與周?chē)M織粘連，且部分器官變形。 術(shù)后3月，管-單-閉組或管-單-開(kāi)組結(jié)扎側(cè)的附睪尾和輸精管高度腫脹，腫脹的輸精管呈

8、乳白色，約占附睪尾至結(jié)扎處或開(kāi)放處的輸精管長(zhǎng)度的3/5。 2．睪丸組織學(xué)： 精子發(fā)生損害的主要特征是：生精小管萎縮，直徑變小，生精上皮變薄，生精細(xì)胞脫落、數(shù)量減少且出現(xiàn)退化細(xì)胞和多核細(xì)胞。 術(shù)后10天，管單一閉組結(jié)扎側(cè)和假手術(shù)側(cè)各有1/7個(gè)睪丸的精子發(fā)生受到嚴(yán)重?fù)p害，兩側(cè)的睪丸體積或生精小管平均直徑無(wú)顯著性差異。囊-單-閉組結(jié)扎側(cè)和假手術(shù)側(cè)各有3/8個(gè)睪丸的精子發(fā)生受到嚴(yán)重?fù)p害，另2/8個(gè)睪丸的精子發(fā)生受到輕度損

9、害，兩側(cè)的睪丸體積或生精小管平均直徑無(wú)顯著性差異。管-單-開(kāi)組結(jié)扎側(cè)(所有4個(gè)睪丸)和假手術(shù)側(cè)(所有5個(gè)睪丸)精子發(fā)生均未受到嚴(yán)重?fù)p害，兩側(cè)的睪丸體積或生精小管平均直徑無(wú)顯著性差異。 術(shù)后3月，管-單-閉組或管-單-開(kāi)組結(jié)扎側(cè)和假手術(shù)側(cè)睪丸的精子發(fā)生均未受到嚴(yán)重?fù)p害，兩側(cè)的睪丸體積或生精小管平均直徑無(wú)顯著性差異。 3．附睪組織學(xué)： 結(jié)扎對(duì)附睪的影響主要表現(xiàn)在：結(jié)扎側(cè)附睪管的擴(kuò)張和精子在附睪管內(nèi)郁積。 術(shù)后

10、10天，管-單-閉組結(jié)扎側(cè)附睪內(nèi)精子團(tuán)的總體積、尾部附睪管或尾部精子團(tuán)的體積與假手術(shù)側(cè)相比有增加趨勢(shì)，增加43％-62％，但差異無(wú)顯著性。囊-單-閉組結(jié)扎側(cè)尾部附睪管或尾部附睪管腔的體積與假手術(shù)側(cè)相比均有顯著性增加，增加38％-73％；附睪總體積或附睪內(nèi)精子團(tuán)的總體積與假手術(shù)側(cè)相比有增加趨勢(shì)，增加13％-95％，但差異無(wú)顯著性。管-單-開(kāi)組結(jié)扎側(cè)附睪尾的體積或尾部附睪管的體積與假手術(shù)側(cè)相比似有減小趨勢(shì)(減少21％-24％)，而精子團(tuán)的總

11、體積或尾部精子團(tuán)的體積似有增加趨勢(shì)(增加14％-17％)，但差異均無(wú)顯著性。 術(shù)后3月，管-單-閉組和管-單-開(kāi)組的結(jié)扎側(cè)均出現(xiàn)附睪管的高度擴(kuò)張和精子郁積。結(jié)扎側(cè)附睪或附睪尾的體積、附睪內(nèi)精子團(tuán)的總體積以及附睪尾內(nèi)附睪管、附睪管管腔、精子團(tuán)的體積均顯著增加到假手術(shù)側(cè)1.64～3.87倍(管-單-閉組)或1.43～2.61倍(管-單-開(kāi)組)。 4、輸精管組織學(xué)： 輸精管結(jié)扎對(duì)輸精管的影響主要表現(xiàn)在結(jié)扎側(cè)輸精管的擴(kuò)張

12、和精子郁積。 術(shù)后10天，管-單-閉組或管-單-開(kāi)組結(jié)扎側(cè)輸精管的管徑，輸精管內(nèi)上皮層及管腔的體積分?jǐn)?shù)或輸精管內(nèi)精子團(tuán)的體積分?jǐn)?shù)，與假手術(shù)側(cè)相比均無(wú)顯著性差異。 術(shù)后3月，管-單-閉組或管-單-開(kāi)組均有結(jié)扎近端輸精管的高度擴(kuò)張和精子郁積。結(jié)扎側(cè)的輸精管內(nèi)上皮層及管腔的體積分?jǐn)?shù)和精子團(tuán)的體積分?jǐn)?shù)分別顯著增加到假手術(shù)側(cè)的2.52、4.28倍(管-單-閉組)或2.06、3.60倍(管-單-開(kāi)組)。 結(jié)論： 1．

13、該研究顯示，①經(jīng)腹股溝管的輸精管結(jié)扎，不引起睪丸、附睪、輸精管與周?chē)M織的粘連。②經(jīng)腹股溝管的開(kāi)放性(共4個(gè)睪丸)及閉合性(6/7個(gè)睪丸)輸精管結(jié)扎術(shù)后10天，睪丸的精子發(fā)生未見(jiàn)明顯損害。本文研究和我們既往的研究顯示，經(jīng)陰囊的近附睪端輸精管結(jié)扎術(shù)后10天均引起睪丸與周?chē)M織的粘連，閉合性(見(jiàn)于4/12<'[5]>、3/8個(gè)睪丸)及開(kāi)放性(所有12個(gè)睪丸<'[5]>)結(jié)扎術(shù)后10天引起了嚴(yán)重的精子發(fā)生損害。這有力的說(shuō)明，輸精管結(jié)扎術(shù)后早期

14、對(duì)精子發(fā)生的損害與手術(shù)創(chuàng)傷或睪丸周?chē)难装Y刺激有關(guān)。 2．該研究顯示，經(jīng)腹股溝管的閉合性及開(kāi)放性輸精管結(jié)扎術(shù)后3月，附睪尾、輸精管腫脹，附睪管及輸精管內(nèi)精子郁積，但睪丸內(nèi)的精子發(fā)生未見(jiàn)明顯損害。我們既往的研究<'[5,6]>顯示，經(jīng)陰囊的近附睪端輸精管閉合性結(jié)扎術(shù)后3月，約有一半的睪丸有嚴(yán)重的精子發(fā)生損害。經(jīng)陰囊的近附睪端閉合性輸精管結(jié)扎后，睪丸產(chǎn)生的精子不能貯存于擴(kuò)張性好的兔輸精管，附睪內(nèi)貯存的精子也很有限<'[5,6]>；而