丙戊酸鈉對Kasumi-1細(xì)胞裸鼠移植瘤細(xì)胞周期的影響.pdf

1、目的:
　　 染色體易位產(chǎn)生的AML1／ETO的融合蛋白異常募集組蛋白脫乙?；?HDAC)抑制ANL1靶基因的轉(zhuǎn)錄是t(8:21)急性白血病關(guān)鍵的發(fā)病機(jī)制。本研究探討HDAC抑制劑丙戊酸鈉(valproic acid,VPA)對Kasumi-1細(xì)胞裸鼠移植瘤生長的抑制作用及其對細(xì)胞周期的影響。為VPA治療白血病提供更好的理論依據(jù)。
　　 材料與方法:
　　 建立Kasumi-1細(xì)胞裸鼠移植瘤模型,研究VPA對K

2、asumi-1細(xì)胞裸鼠移植瘤生長抑制作用,應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測VPA對于瘤組織細(xì)胞周期的影響；應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法、RT-PCR及Western Blot等生物化學(xué)技術(shù)檢測瘤體組織細(xì)胞周期調(diào)節(jié)相關(guān)基因的mRNA或蛋白表達(dá)水平的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.Kasumi—1細(xì)胞的移植瘤模型特點(diǎn)
　　 裸鼠接種Kasumi-1細(xì)胞后,第3天開始成瘤,成瘤率為100％。荷瘤裸鼠隨著時間延長,腫瘤體積逐漸增大,繪制腫瘤生

3、長曲線。經(jīng)病理切片檢查,裸鼠的外周血、肝臟、肺臟均未見瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。RT-PCR方法檢測Kasumi-1細(xì)胞標(biāo)志性融合基因AML1／ETO,證實(shí)其表達(dá)存在。
　　 2.VPA對于裸鼠移植瘤的生長抑制作用
　　 VPA體內(nèi)用藥明顯抑制裸鼠Kasumi-1細(xì)胞移植瘤的生長,VPA組平均瘤體重為(0.46±0.17)g,相對腫瘤體積比為0.46±0.17,對照組平均瘤體重為(1.57±0.25)g,相對腫瘤體積比為1.57±0.

4、25,VPA用藥組瘤體積及重量與對照組相比明顯縮小,腫瘤抑制率(IR％)為57.25％。
　　 3.VPA對于細(xì)胞周期的影響
　　 流式細(xì)胞儀檢測VPA組和對照組細(xì)胞周期的改變,結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析發(fā)現(xiàn),VPA組G0／G1期細(xì)胞比例為(60.93±1.18)％、對照組G0／G1細(xì)胞的比例為(74.05±3.06)％,VPA組與對照組相比明顯升高,具有明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)
　　 4.VPA對細(xì)胞周期素依賴型激

5、酶(CDK,cyclin-dependent kinase)抑制因子P21WAF1／CIP影響
　　 VPA體內(nèi)用藥應(yīng)用RT-PCR、Western-blot和免疫組化的方法檢測P21WAF1／CIP的變化,結(jié)果顯示:VPA誘導(dǎo)P21WAF1／CIPmRNA表達(dá)明顯增加。對照組和VPA組P21WAF1／CIP分別為(0.495±0.060)和(0.766±0.104),具有明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。并且VPA誘導(dǎo)P21WA

6、F1／CIP蛋白表達(dá)量增加,VPA組P21WAF1／CIP蛋白表達(dá)水平(0.900±0.113)明顯高于對照組(0.3900±0.012),具有顯著性差異(P<0.01)。經(jīng)免疫組化檢測瘤組織中P21WAF1／CIP的表達(dá)發(fā)現(xiàn)VPA組也明顯多于對照組統(tǒng)計學(xué)。
　　 5.VPA對pRb影響
　　 VPA體內(nèi)用藥應(yīng)用Western-blot和免疫組化的方法檢測pRb的變化,結(jié)果顯示,pRb蛋白表達(dá)水平為(0.342±0.06

7、2)顯著低于對照組的(0.813±0.042),具有明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。經(jīng)免疫組化檢測瘤組織中pRb的表達(dá)發(fā)現(xiàn),VPA組明顯少于對照組(P<0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 HDAC抑制劑VPA體內(nèi)用藥能夠抑制Kasumi-1細(xì)胞裸鼠移植瘤的生長,并且使細(xì)胞阻滯于G0／G1期。VPA誘導(dǎo)P21WAF1／CIP表達(dá)的增加,pRb表達(dá)的減少。其機(jī)制可能是VPA通過誘導(dǎo)P21WAF1／CIP表達(dá)的增加,抑制細(xì)胞周期