EB病毒LMP1通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子c-Jun-Ets-1間Cross-talk調(diào)節(jié)金屬蛋白酶9表達(dá)的分子機(jī)制研究.pdf

1、鼻咽癌是以高轉(zhuǎn)移性為突出特點(diǎn)的惡性腫瘤,大部分患者由于早期發(fā)生轉(zhuǎn)移而預(yù)后不良.目前對(duì)鼻咽癌發(fā)生的分子機(jī)制進(jìn)行了較為廣泛而深入的研究,但對(duì)鼻咽癌侵襲和轉(zhuǎn)移分子機(jī)制的認(rèn)識(shí)很少,故迫切需要闡明鼻咽癌侵襲和轉(zhuǎn)移分子機(jī)制以及對(duì)其轉(zhuǎn)移進(jìn)行有效防治.我們確定了"LMP1通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子c-Jun/Ets-1間cross-talk調(diào)節(jié)鼻咽癌細(xì)胞中MMP9表達(dá)的分子機(jī)制"的課題,這將是對(duì)LMP1介導(dǎo)的MMP9表達(dá)轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制的重要拓展.首先,從微陣列技術(shù)篩選

2、轉(zhuǎn)移相關(guān)基因和觀(guān)察細(xì)胞生物學(xué)行為兩方面,初步探討LMP1對(duì)鼻咽癌細(xì)胞侵襲能力的影響.選用已建立的受四環(huán)素及其衍生物強(qiáng)力霉素(Dox)調(diào)控的LMP1穩(wěn)定表達(dá)鼻咽癌細(xì)胞株pTet-on-LMP1 HNE2(L7細(xì)胞),其特點(diǎn)為隨Dox誘導(dǎo)濃度增加,LMP1表達(dá)增加.根據(jù)前述的背景知識(shí)及確定的課題,我們?cè)贚7細(xì)胞中進(jìn)一步開(kāi)展以L(fǎng)MP1為核心的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的研究.首先為了確定LMP1對(duì)轉(zhuǎn)錄因子Ets-1表達(dá)的影響,我們采用RT-PCR、West

3、ern blot、免疫共沉淀、凝膠遷移滯留測(cè)定(EMSA)分別從RNA表達(dá)、蛋白質(zhì)表達(dá)、蛋白磷酸化狀態(tài)、DNA結(jié)合活性四個(gè)方面系統(tǒng)研究LMP1對(duì)Ets-1的調(diào)控,在此基礎(chǔ)上,應(yīng)用MEK/ERK通路的小分子特異性阻斷物PD98059阻斷后,再進(jìn)行Dox誘導(dǎo)發(fā)出,LMP1對(duì)p-ERK表達(dá)的促進(jìn)作用被明顯抑制,同時(shí)發(fā)現(xiàn)Ets-1表達(dá)和磷酸化狀態(tài)也受到明顯抑制,這些結(jié)果說(shuō)明,LMP1可通過(guò)ERK激活EtS-1表達(dá).在確定MP1介導(dǎo)Ets-1表達(dá)

4、的基礎(chǔ)上,結(jié)合LMP1通過(guò)JNK激活A(yù)P-1的工作基礎(chǔ),對(duì)c-Jun和Ets-1間的相互作用(cross-talk)是否參與LMP1調(diào)控MMP9表達(dá)的過(guò)程進(jìn)行了探討.綜合以上結(jié)果,我們以鼻咽癌為研究對(duì)象,以信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究的深層次模式Cross-talk為為出發(fā)點(diǎn),在確定LMP1介導(dǎo)ERK/Ets-1通路的基礎(chǔ)上,探討了LMP1通過(guò)c-Jun和Ets-1間Cross-talk促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞中MMP9表達(dá),既為L(zhǎng)MP1介導(dǎo)惡性腫瘤轉(zhuǎn)移的分子機(jī)