不同中醫(yī)治法抗急性心肌缺血的作用及機(jī)理研究.pdf

1、一、研究背景與目的: 本研究嘗試從橫向的角度，開展對心痛發(fā)作期的三種常用治法(活血祛瘀法、芳香溫通法和通陽豁痰法)抗急性心肌缺血的作用機(jī)理、途徑的深入探討。本課題通過實(shí)驗(yàn)研究，觀察心痛發(fā)作期的三種常用治法(活血祛瘀法、芳香溫通法和通陽豁痰法)的相應(yīng)代表方(血府逐瘀湯、瓜蔞薤白半夏湯和冠心蘇合膠囊)抗急性心肌缺血的作用和機(jī)理，并結(jié)合分子生物學(xué)、免疫組化、血清藥理學(xué)、形態(tài)學(xué)等方面的技術(shù)和方法，從細(xì)胞、分子水平上研究、推導(dǎo)心痛發(fā)作期三

2、種不同治法抗急性心肌缺血的作用和途徑，并且比較不同治法之間作用途徑的異同點(diǎn)、作用效應(yīng)的差異等。通過本研究，期望能從更深的層次認(rèn)識中醫(yī)辨證論治治療急性心肌缺血的作用機(jī)理，體現(xiàn)同病異治的科學(xué)內(nèi)涵。同時(shí)，為將來開發(fā)不同治療靶點(diǎn)治療急性心肌缺血的中藥復(fù)方建立一定的工作基礎(chǔ)。 二、研究方法: 1、心痛發(fā)作期不同治法對垂體后葉素致急性心肌缺血大鼠心肌組織的保護(hù)作用為了探討心痛發(fā)作期的三種不同治法對于急性心肌缺血的心肌組織的保護(hù)作用，

3、本研究選用心痛發(fā)作期的三種不同治法(活血祛瘀法、通陽豁痰法、芳香溫通法)的相應(yīng)代表方：血府逐瘀湯、瓜蔞薤白半夏湯、冠心蘇合膠囊分別作用于垂體后葉素(Pit)所致的急性心肌缺血的大鼠模型，觀察這三種方藥對pit致急性心肌缺血大鼠的血漿ET、心肌組織eNOs的mRNA表達(dá)以及大鼠心電圖的影響，從而推導(dǎo)心痛發(fā)作期的三種不同治法通過抵抗冠狀動脈痙攣，保護(hù)、改善心肌組織的血液循環(huán)等途徑對抗急性心肌缺血的機(jī)理。 2、心痛發(fā)作期不同治法對急性

4、心肌缺血大鼠心肌組織的凋亡相關(guān)基因 bcl-2、bax的mRNA 表達(dá)的影響實(shí)驗(yàn)大鼠經(jīng)用上述方法灌胃和注射Pit后，開胸取心臟，選取心尖部心肌組織，用RT-PCR方法檢測凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax的mRNA表達(dá)，并計(jì)算bcl-2/bax的比值。 3、心痛發(fā)作期不同治法對新生大鼠離體心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的保護(hù)作用通過研究心痛發(fā)作期的三種常用治法 (活血祛瘀法、通陽豁痰法和芳香溫通法)的代表方—血府逐瘀湯、瓜蔞薤白半夏湯、冠心

5、蘇合膠囊的含藥血清對新生大鼠離體心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷后細(xì)胞生存率、細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞 MMDA 含量、乳酸脫氫酶(LDH)活性等的干預(yù)作用，從而推導(dǎo)心痛發(fā)作期的三種不同治法對心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的保護(hù)作用。 三、研究結(jié)果: 1．建立了本研究的垂體后葉素(Pit)致大鼠急性心肌缺血的模型，經(jīng)過心電圖的檢測和統(tǒng)計(jì)學(xué)的分析，說明造模成功。確定了用于造模的Pit實(shí)際劑量為 1.5u/kg(大鼠尾靜脈注射)，并且于注射后 30s

6、～10min 時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)典型的心肌缺血的心電圖，表現(xiàn)為ST段抬高，心律失常、甚至伴有Q波的出現(xiàn)等。 2．心痛發(fā)作期三種不同治法相應(yīng)的代表方對Pit致急性心肌缺血大鼠的心電圖有明顯的改善作用。在高劑量時(shí)，活血祛瘀法作用效應(yīng)最強(qiáng)。低劑量時(shí)，芳香溫通法作用效應(yīng)最強(qiáng)，其次為活血祛瘀法，再次為通陽豁痰法。 3．心痛發(fā)作期的三種不同治法均可通過降低血漿ET水平的途徑發(fā)揮抗急性心肌缺血的作用。三種治法比較，降低急性心肌缺血的血漿ET水

7、平的作用效應(yīng)存在著差異，其中，活血祛瘀法降ET作用效應(yīng)最強(qiáng)。 4．心痛發(fā)作期的三種不同治法均能通過上調(diào)心肌e N O S的 mRNA 表達(dá)，提高eN O S 的活性，發(fā)揮對急性缺血的心肌組織的保護(hù)作用。但三種治法的作用效應(yīng)存在著顯著差異，體現(xiàn)在：高劑量水平時(shí)，通陽豁痰法的作用效應(yīng)最強(qiáng)，顯著優(yōu)于活血祛瘀法和芳香溫通法。低劑量水平時(shí)，芳香溫通法作用效應(yīng)最強(qiáng)，顯著優(yōu)于通陽豁痰法和活血祛瘀法；而通陽豁痰法又顯著優(yōu)于活血祛瘀法。

8、5．心痛發(fā)作期的三種不同治法均能上調(diào) bcl—2/bax 比值，即上調(diào)抑凋亡基因bcl-2的mRNA 表達(dá)，或/和下調(diào)促凋亡基因bax的mRNA 表達(dá)，以減少心肌細(xì)胞的凋亡，從而對心肌組織起保護(hù)作用。三種不同治法對bcl-2/bax比值的上調(diào)作用效應(yīng)存在著顯著的差異，表現(xiàn)為：芳香溫通法作用效應(yīng)最強(qiáng)，其次為通陽豁痰法，再次為活血祛瘀法。同時(shí)，通陽豁痰法和芳香溫通法的代表方藥物組大鼠心肌組織的 bcl—2/bax 的比值顯著高于正常對照組。

9、 6．新生大鼠心肌細(xì)胞經(jīng)缺氧 4h，復(fù)氧2h，可明顯造成心肌細(xì)胞的損傷?？捎^察到：心肌細(xì)胞的搏動頻率和幅度顯著減少，并且心肌細(xì)胞的生存率顯著地下降、MDA 含量及 LDH 活性均顯著升高，說明造模成功。 7．運(yùn)用心痛發(fā)作期的三種不同治法的代表方含藥血清對大鼠心肌細(xì)胞的缺氧—復(fù)氧進(jìn)行干預(yù)，均能顯著降低缺氧—復(fù)氧損傷大鼠心肌細(xì)胞的MDA含量，說明三種治法均有抗氧化作用及清除氧自由基的作用。但三種治法的作用效應(yīng)有顯著的差異，芳

10、香溫通法作用效應(yīng)最強(qiáng)，優(yōu)于通陽豁痰法和活血祛瘀法。 8．心痛發(fā)作期的三種不同治法的代表方含藥血清均能顯著降低缺氧—復(fù)氧損傷大鼠心肌細(xì)胞 LDH 的活性，尤其芳香溫通法的代表方含藥血清作用效應(yīng)最強(qiáng)，其次為通陽豁痰法的含藥血清。可以推測，芳香溫通法對心肌細(xì)胞缺氧—復(fù)氧損傷的保護(hù)作用最強(qiáng)，其次是通陽豁痰法，再次為活血祛瘀法。 9．三種治法的代表方含藥血清均能顯著降低缺氧—復(fù)氧損傷的心肌細(xì)胞的凋亡指數(shù)，其中芳香溫通法代表方含藥血

11、清作用效應(yīng)最強(qiáng)，其次為通陽豁痰法代表方含藥血清，再次為活血祛瘀法代表方含藥血清；說明，心痛發(fā)作期三種不同治法均有通過抗心肌細(xì)胞凋亡的途徑，對缺氧—復(fù)氧損傷的心肌細(xì)胞發(fā)揮保護(hù)作用。三種治法當(dāng)中，芳香溫通法作用效應(yīng)最強(qiáng)，其次為通陽豁痰法，再次為活血祛瘀法。 10．心痛發(fā)作期的三種不同治法代表方含藥血清均能顯著提高缺氧—復(fù)氧損傷的心肌細(xì)胞的生存率，說明三種不同治法均能提高缺氧—復(fù)氧狀態(tài)下心肌細(xì)胞的生存率；并且本結(jié)果還提示：芳香溫通法和

12、通陽豁痰法的作用效應(yīng)顯著優(yōu)于活血祛瘀法。 四、結(jié)論: 1．心痛發(fā)作期的三種不同治法—活血祛瘀法、通陽豁痰法和芳香溫通法，均能通過多種途徑①調(diào)節(jié)血管舒縮因子的分泌，減少縮血管因子ET的合成與分泌，抵抗冠狀動脈痙攣，維持冠脈循環(huán)血量；②調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的表達(dá)；③抑制氧自由基生成或/和加強(qiáng)對氧自由基的清除；④提高心肌細(xì)胞在缺氧—復(fù)氧損傷中的生存能力(生存率)；⑤抑制缺氧—復(fù)氧損傷的心肌細(xì)胞的凋亡等途徑，發(fā)揮抗急性心肌缺

13、血的作用。 2．心痛發(fā)作期的三種不同治法抗急性心肌缺血的多種作用途徑相互間是有著相互關(guān)聯(lián)性和協(xié)同作用的。表現(xiàn)在：①保護(hù)心肌的功能方面，其一通過減少縮血管因子ET的合成與分泌，達(dá)到抗動脈痙攣、維持冠脈血流量，保證心肌血供；其二通過調(diào)節(jié)心肌組織eNOS的mRNA表達(dá)，提高eNOS的活性，促進(jìn)內(nèi)源性一氧化氮(eNO)的合成，維持心肌 (尤其是心室肌)舒縮功能，兩者的協(xié)同作用，保護(hù)心肌組織的功能。②抗心肌細(xì)胞凋亡方面，一是通過調(diào)節(jié)心肌細(xì)

14、胞凋亡的相關(guān)基因的比例，上調(diào)抗凋亡基因bcl-2的表達(dá)，下調(diào)促凋亡基因bax的表達(dá)；二是通過抑制自由基形成或/和加強(qiáng)對氧自由基的清除，兩方面的協(xié)同作用可抑制心肌細(xì)胞的凋亡，提高細(xì)胞的生存率，從而對心肌細(xì)胞的缺氧—復(fù)氧損傷發(fā)揮保護(hù)作用。 3．心痛發(fā)作期的三種不同治法抗急性心肌缺血的作用對于不同的途徑，其作用效應(yīng)有顯著差異。表現(xiàn)在①活血祛瘀法側(cè)重于通過降ET的途徑起抗急性心肌缺血的作用，其作用效應(yīng)顯著優(yōu)于通陽豁痰法和芳香溫通法。②芳

15、香溫通法和通陽豁痰法側(cè)重于通過抑制氧自由基形成或/和加強(qiáng)對氧自由基的清除；促進(jìn)eNOS的mRNA表達(dá)，增加舒血管、保護(hù)心肌組織的NO合成；以及抗缺氧—復(fù)氧損傷導(dǎo)致的心肌細(xì)胞凋亡等途徑，保護(hù)心肌細(xì)胞，抵抗缺氧—復(fù)氧損傷。這兩種治法在這幾種途徑的作用效應(yīng)顯著優(yōu)于活血祛瘀法。 4．心痛發(fā)作期的三種不同治法中，芳香溫通法和通陽豁痰法在抗急性心肌缺血的多種作用途徑上都顯著優(yōu)于活血祛瘀法。尤其是芳香溫通法，在多種抗急性心肌缺血的作用途徑上作