通陽逐瘀法激活MAPKs-IL-6信號通路抗急性心肌缺血作用及機制研究.pdf

1、目的：
　　 通過辛溫通陽中藥蔥白提取物和逐瘀中藥大黃提取物不同配伍比例治療急性心肌缺血的對比研究,探討通陽逐瘀法對急性心肌缺血大鼠MAPKs/IL-6信號通路的調節(jié)作用及機制研究,初步揭示通陽逐瘀法治療急性心肌缺血的生物學基礎。
　　 方法：
　　 本研究選用健康純種SD雄性大白鼠,體重為200-230克,3-4月齡64只,隨機分為正常對照組、空白模型組、蔥白提取物組、蔥白提取物與大黃提取物7:3、5:5、3:

2、7組、大黃提取物組及硝酸甘油組,共8組,每組8只。參照郭延松等的方法制備急性心肌缺血模型,適應性喂養(yǎng)1周后,將大鼠腹腔注射3.5％戈巴比妥鈉腹腔注射(35mg/kg)麻醉,仰位固定于鼠板上,將大鼠號powerlab/8s型八導數(shù)據(jù)分析記錄儀連接好,于開胸前記錄一段正常心電圖,隨后將大鼠氣管切開連Y型氣管插管,另一端連與動物微量呼吸機出氣孔,以10×60ml/min持續(xù)進氣,然后開胸結扎左冠狀動脈制備急性心肌缺血模型,于造模后十二指腸給藥

3、,4小時后觀察相關指標,各藥物組給相應濃度藥物,假手術組與模型組給予同體積的生理鹽水,用注射器于結扎后5分鐘給藥,4h后采集血樣及心臟。在腹部中線偏左開口,找到十二指腸備用,用生理鹽水紗布覆蓋傷口,4小時后采集血樣及心肌組織,觀察相關指標,給藥體積為2ml/kg,正常對照組和空白模型組給與同等體積生理鹽水、蔥白提取物組按600mg·kg-1給藥、大黃提取物組按400mg·kg-1給藥、蔥白提取物與大黃7:3、5:5、3:7組按蔥白與大黃

4、上述濃度混合、硝酸甘油組按80mg·kg-1給藥,觀察4小時后,再次檢測心電圖,觀測完畢后,立即以血管鉗暫時夾閉大鼠胸壁,快速行大鼠腹主動脈取血,立即將其中2ml血注入含有10%EDTA二鈉30μl和胰肽酶40μl的試脈中,混勻,4℃,3000rpm離心10min,分離血漿,放置于-70℃冰箱中保存待測,其余血3500rpm離心20min,取上清,分裝后置于-70℃冰箱中保存待測。測定前,將樣本置于冷水中復融,混勻,再次4℃,3000r

5、pm離心5min,取上清液測定。通過標準Ⅱ導心電圖觀測(標準電壓為0.1mv,走紙速度50mm/s),分別分別記錄給藥前后心電圖,測量ST段上移平均數(shù),給藥前后心電圖ST段變化。
　　 通過眥染色分析大鼠心肌組織病理變化,ELISA法檢測血清cTnI、CK-MB、LDH、IL-6的含量。采用化學方法檢測心肌組織}t2S含量。WesternBlot法檢測P-ERK、P-JNK、P-p38在急性心肌缺血大鼠心肌組織中的表達,用實時熒

6、光定量PCR技術檢測急性心肌缺血大鼠心肌組織中IL-6mRNA的表達;采用超聲技術檢測急性心肌缺血大鼠心功能。
　　 結果：
　　 1.對急性心肌缺血大鼠心電圖、左心功能、心肌損傷標志物的影響:與正常對照組之間比較,空白模型組大鼠ST段顯著升高(P＜0.01);與空白模型組比較,大黃提取物組無顯著性差異(P＞0.05),其余各治療組織組均可降低大鼠ST段(P＜0.05,P＜0.01),蔥白提取物組效果最為顯著(P＜0.0

7、1),通陽逐瘀組之間沒有顯著差異(P＞0.05)。
　　 與正常對照組比較,空白模型組大鼠血清cTnI明顯升高(P＜0.01);與空白模型組比較,各治療組大鼠血清cTnI水平明顯降低(P＜0.05,P＜0.01),蔥白提取物組降低最為明顯,優(yōu)于各治療組,通陽逐瘀組之間沒有顯著差異(P＞0.05)
　　 與正常對照組比較,空白模型組大鼠血清CK-MB明顯升高(P＜0.01)。與空白模型組比較,各治療組大鼠血清CK-MB明顯

8、降低(P＜0.05,P＜0.01),蔥白提取物組與硝酸甘油組降低最為明顯,組間無顯著差異(P＞0.05),蔥白提取物組療效優(yōu)于大黃提取物組及通陽逐瘀組。
　　 與正常對照組比較,空白模型組大鼠血清LDH明顯升高(P＜0.01)。與空白模型組比較,各治療組大鼠血清LDH明顯降低(P＜0.05,P＜0.01),大黃提取物組、通陽逐瘀組和硝酸甘油組之間相比較無顯著性差異,優(yōu)于蔥白提取物組,通陽逐瘀組之間沒有顯著差異(P＞0.05)。<

9、br>　　 與正常組比較,空白模型組EF、FS、Em/Am值明顯降低(P＜0.01);與模型組比較,各治療組EF,FS值、Ern/Am(除大黃提取物組外)值明顯升高(P＜0.01);對EF值和FS值的影響,通陽逐瘀組之間、通陽逐瘀組和蔥白提取物組沒有顯著差異(P＞0.05),優(yōu)于大黃提取物組和硝酸甘油組(P＜0.05);對Em/Am值的影響,通陽逐瘀組之間、通陽逐瘀組和硝酸甘油組沒有顯著差異(P＞0.05),優(yōu)于蔥白提取物組。

10、　　 2.對急性心肌缺血大鼠組織形態(tài)學的影響心肌組織切片經HE染色,光鏡下觀察各組大鼠心肌細胞病理變化,結果顯示:正常組:大部分心肌纖維結構正常,排列成束,心肌細胞橢圓形或短梭形,位于細胞中央,肌纖維間散在毛細血管。模型組:心肌纖維腫脹,部分心肌纖維斷裂,可見小灶性肌纖維壞死,肌纖維結構不清清;肌纖維間毛細血管擴張充血,及炎細胞灶性浸潤。蔥白提取物組大部分心肌纖維結構正常,僅見少數(shù)肌纖維腫脹,排列成束,肌纖維間散在毛細血管,未見灶性壞

11、死。通陽逐瘀(7:3)組部分心肌纖維結構正常,見少數(shù)肌纖維腫脹,肌纖維間毛細血管增多。其余各治療組可見部分心肌腫脹,結構模糊,部分心肌纖維斷裂,肌纖維間少數(shù)毛細血管擴張充血管增多。
　　 3.對急性心肌缺血大鼠心肌組織H2S的影響與正常對照組比較,空白模型組H2S水平明顯降低(P＜0.01);與空白模型組比較,各治療組H2S水平顯著升高(P＜0.01),通陽逐瘀(7:3)組升高H2S水平最為顯著,明顯優(yōu)于蔥白提取物組、大黃提取物

12、組、硝酸甘油組和其它通陽逐瘀組。
　　 4.對急性心肌缺血大鼠MAPKs的影響與正常對照組比較,模型組P-ERK的表達顯著升高(22.54%),提示造模成功。與模型組比較,除通陽逐瘀(7:3)組外(P＞0.05),其余各治療組P-ERK顯著減少,各干預組抑制率分別為:通陽逐瘀(5:5)組為6.29%、硝酸甘油組為8.94%、蔥白提取物組為9.05%、大黃提取物組為11.17%、通陽逐瘀(3:7)組為13.34%。
　　

13、與正常對照組比較,模型組P.JNK蛋白表達顯著升高(44.58%),提示造模成功。與模型組比較,各治療組P-JNK顯著降低。各干預組抑制率分別為:通陽逐瘀(3:7)組為14.17%、通陽逐瘀(5:5)組為24.83%、大黃提取物組為25.59%、蔥白提取物組為26.37%、硝酸甘油組為26.56%、通陽逐瘀(7:3)組為31.73%。
　　 與正常對照組比較,模型組P.p38蛋白表達顯著升高(88.0%),提示造模成功。與模型組

14、比較,各治療組P-p38表達顯著降低,各干預組抑制率分別為:大黃提取物組為18.91%、通陽逐瘀(3:7)組為24.31%、通陽逐瘀(5:5)組為31.64%、蔥白提取物組為44.20%、通陽逐瘀(7:3)組為45.25%、硝酸甘油組為45.29%。
　　 5.對急性心肌缺血大鼠心肌組織IL-6的影響與正常對照組比較,模型組大鼠血清IL-6含量明顯升高(P＜0.01);與空白模型組比較,除通陽逐瘀(3:7)組外,其余各治療組均可

15、以降低血清IL-6含量,通陽逐瘀(7:3)組降低血清IL-6水平最為顯著(P＜0.01),優(yōu)于通陽逐瘀(5:5)組、蔥白提取物組、大黃提取物組和硝酸甘油組(P＜0.05)。
　　 與正常對照組比較,模型組大鼠心肌組織IL-6mRNA水平明顯升高(P＜0.05),擴增倍數(shù)為1.00;與空白模型組比較,各治療組均可降低IL-6mRNA水平,個干預組抑制率分別為:蔥白提取物組為16.49%、硝酸甘油組為27.33%、大黃提取物組為30

16、.5%、通陽逐瘀(5:5)組為41.32%、通陽逐瘀(3:7)組為41.96%、其中通陽逐瘀(7:3)組為45.98%。
　　 結論：
　　 ①通陽逐瘀法干預急性心肌缺血的免疫機制可能與激活MAPKs及IL-6mRNA表達,影響MAPKs/IL-6信號轉導通路有關。
　　 ②通陽逐瘀法通過改善心電圖、提高心功能、抑制心肌酶外漏,減輕心肌損傷。
　　 ③通陽逐瘀法通過對氣體信號分子H2S的調控發(fā)揮對缺血心肌