cGMP-PKG信號通路在心肌缺血-再灌注損傷的作用機制研究.pdf

1、第一部分：
　　目的：觀察腦鈉肽(brain natriuretic peptide,BNP)激活cGMP/PKG信號通路的心肌保護作用是否與PI3K、ERK1/2蛋白激酶的激活有關。
　　方法：將84只新西蘭兔隨機分為7組:假手術組、對照組、BNP組、BNP+LY294002組(LY294002為磷脂酰肌醇3激酶PI3K抑制劑)、LY294002組、BNP+PD98059組(PD98059為絲裂原激活蛋白激酶MAPKK抑制

2、劑)、PD98059組,每組12只,7組均于結(jié)扎左回旋支45min后恢復左回旋支血流,進行再灌注180min。假手術組只開胸不結(jié)扎冠狀動脈;對照組再灌注前5min靜脈注射生理鹽水(O.lml/min);BNP組再灌注前5min靜脈注射BNP(0.01yg/kg/min);BNP+LY294002組再灌注前5min靜脈注射BNP(0.01yg/kg/min)和LY294002(0.3mg/Kg);LY294002組再灌注前5min靜脈注射

3、LY294002(0.3mg/Kg);BNP+PD98059組再灌注前5min靜脈注射BNP(0.01Ug/kg/min)和PD98059(0.3mg/Kg);PD98059組再灌注前5min靜脈注射PD98059(0.3mg/Kg)。實驗過程中記錄各組缺血前、缺血45min、再灌注60min、再灌注120min及再灌注180min心率和平均動脈壓;監(jiān)測各組實驗中心電變化及再灌注心律失常發(fā)生情況;實驗終末,各組隨機抽取6只兔子心臟做左室

4、梗死面積測定,采用Evan’sblue和TTC雙染色法測定心肌相對梗死面積(梗死面積占缺血危險區(qū)的百分比);每組另外6只兔子心臟取梗死邊緣區(qū)組織,Westernblot方法測定P-Akt/Akt、P-ERK1/2/ERK1/2的表達。
　　結(jié)果：1.血流動力學:心率(Heart rate,HR)和平均動脈壓(Mean arterial blood pressure,MABP)在基線水平上無明顯差異(P>0.05)。與基線水平相比,

5、HR和MABP在缺血以及再灌注時期有明顯下降(P〈0.05),而在再灌注時期維持較穩(wěn)定的水平。各組之間HR、MABP差異無顯著性(P>0.05)。
　　2.心律失常:與對照組相比,BNP組心律失常發(fā)生率明顯減少(P〈0.003125)。與BNP組比較,BNP+LY294002組、LY294002組、BNP+PD98059組及PD98059組心律失常明顯增加(P〈0.003125),BNP+LY294002組和LY294002組,B

6、NP+PD98059組和PD98059組差異無顯著性差別(P>0.003125)。
　　3.心肌梗死面積:假手術組無心肌梗死。與對照組比較,BNP組心肌梗死范圍明顯減少(P〈0.05)。與BNP組比較,BNP+LY294002組、LY294002組、BNP+PD98059組及PD98059組梗死面積明顯增加(P〈0.05)。BNP+LY294002組和LY294002組,BNP+PD98059組和TO98059組差異無統(tǒng)計學意義(

7、P>0.05)。
　　4.激酶磷酸化比例:與對照組比較,BNP組Akt、ERK1/2的磷酸化水平顯著增加(P〈0.05)。與BNP組相比,BNP+LY294002組Akt的磷酸化水平及BNP+PD98059組ERK1/2的磷酸化水平分別明顯降低(P〈0.05)。BNP+LY294002組和LY294002組Akt的磷酸化水平,BNP+PD98059組和TO98059組ERK1/2的磷酸化水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

8、>　　結(jié)論：1.BNP激活cGMP/PKG信號通路對心肌缺血/再灌注損傷產(chǎn)生保護作用。
　　2.cGMP/PKG信號通路的激活與RISK通路的激活有關。
　　第一部分：
　　目的：觀察BNP激活cGMP/PKG信號通路對mPTP開放和GSK-30磷酸化的影響
　　方法：將48只新西蘭兔隨機分為4組:假手術組、對照組、BNP組、BNP+KT5823組(KT5823為蛋白激酶G抑制劑),每組12只,4組均于結(jié)扎左回旋

9、支45min后恢復左回旋支血流,進行再灌注180min。假手術組只開胸不結(jié)扎冠狀動脈;對照組再灌注前5min靜脈注射生理鹽水(0.lml/min);BNP組再灌注前5min靜脈注射BNP(0.01yg/kg/min);BNP+KT5823組再灌注前5min靜脈注射BNP(0.01yg/kg/min)和KT5823(1mg/Kg)。實驗過程中記錄各組缺血前、缺血45min、再灌注60min、再灌注120min及再灌注180min心率和平均

10、動脈壓;監(jiān)測各組實驗中心電變化及再灌注心律失常發(fā)生情況;實驗終末,各組隨機抽取6只兔子心臟做左室梗死面積測定,采用Evan’sblue和TTC雙染色法測定心肌相對梗死面積;每組另外6只兔子心臟取梗死邊緣區(qū)組織,Westernblot方法測定P-GSK-30/GSK-30、細胞質(zhì)細胞色素c/線粒體細胞色素c的表達。
　　結(jié)果：1.血流動力學:HR和MABP在基線水平上無明顯差異(P>0.05)。與基線水平相比,HR和MABP在缺血以

11、及再灌注時期有明顯下降(P<0.05),而在再灌注時期維持較穩(wěn)定的水平。各組之間HR、MABP差異無顯著性(P>0.05)。
　　2.心律失常:與對照組相比,BNP組心律失常發(fā)生率明顯減少(P<0.0125)。與BNP組比較,BNP+KT5823組心律失常明顯增加(P<0.0125)。
　　3.心肌梗死面積:假手術組無心肌梗死。與對照組比較,BNP組心肌梗死范圍明顯減少(P<0.05)。與BNP組比較,BNP+KT5823組

12、梗死面積明顯增加(P<0.05)。4.激酶磷酸化比例:與對照組比較,BNP組GSK-30的磷酸化水平顯著增加,細胞質(zhì)細胞色素c/線粒體細胞色素c明顯減少(P<0.05)。與BNP組相比,BNP+KT5823組GSK-30的磷酸化水平明顯降低,細胞質(zhì)細胞色素c/線粒體細胞色素c顯著增加(P<0.05)。
　　結(jié)論：1.BNP激活cGMP/PKG信號通路所產(chǎn)生的心肌保護作用與抑制mPTP的開放有關。
　　2.cGMP/PKG信號