細(xì)胞外RNA和TLR3-Trif信號通路在心肌缺血再灌注損傷中的信用研究.pdf

1、研究目的:近期的研究提示TLR3通過識別細(xì)胞外RNA(extracellular RNA，exRNA)從而在組織的炎癥損傷中發(fā)揮重要作用。然而，參與機(jī)體天然免疫應(yīng)答的TLR3-Trif依賴信號傳導(dǎo)途徑在急性心肌缺血再灌注(ischemia-reperfusion，I/R)損傷中的作用目前尚未見有報道。因此，本研究旨驗證以下假設(shè):1)TLR3-Trif信號通路參與介導(dǎo)了信號傳導(dǎo)途徑在急性心肌I/R損傷及其引起的心功能不全。2）細(xì)胞凋亡是T

2、LR3-Trif信號通路下游的關(guān)鍵介導(dǎo)因素。3)exRNA參與介導(dǎo)了急性心肌I/R損傷。
　　研究方法及結(jié)果:本研究應(yīng)用結(jié)扎和再灌注左前降支(leftanterior descending，LAD)冠狀動脈建立小鼠實驗性急性MIR模型。在急性MIR模型中，野生型(wild type，WT)小鼠和各種基因敲除小鼠，如Trif敲除小鼠，TLR3敲除小鼠，interferon alpha/beta receptor1(IFNAR1)敲除

3、小鼠分別進(jìn)行了45min LAD結(jié)扎，24h再灌注后，我們對缺血區(qū)(area at risk，AAR)和MI的面積和心臟功能進(jìn)行了比較和評價，我們發(fā)現(xiàn)相比于WT小鼠，Trif敲除小鼠和TLR3敲除小鼠的MI占AAR的比例明顯減小，同時經(jīng)胸超聲心動圖也提示Trif敲除小鼠和TLR3敲除小鼠有著更好的心臟功能。隨后我們對I/R后的心肌炎癥和凋亡經(jīng)行了檢測，我們發(fā)現(xiàn)I/R4h時，Trif敲除小鼠的心肌細(xì)胞凋亡明顯減輕，這在體外膜聯(lián)蛋白V熒光成

4、像，Caspase-3活性檢測，和DNA片段化分析中得以證實。然而出乎我們意外的是，在心肌炎癥因子的表達(dá)水平和中性粒細(xì)胞浸潤方面，Trif和TLR3敲除小鼠與WT小鼠相比并沒有明顯差異。此外，我們觀察到心肌細(xì)胞經(jīng)缺氧/血清剝奪處理和在體心臟經(jīng)I/R損傷后，均可以導(dǎo)致包括RNA的釋放，其中包括微小RNA(microRNA，miRNA)。體外實驗中，壞死細(xì)胞介導(dǎo)的心肌細(xì)胞炎癥因子反應(yīng)在經(jīng)核糖核酸酶(Ribonuclease，RNase)處理