小兒腎母細(xì)胞瘤組織中TAM及VGF-C的表達(dá)對微血管和淋巴管生成的影響及其預(yù)后意義.pdf

1、目的：探討小兒腎母細(xì)胞瘤組織中TAM浸潤及VEGF-C表達(dá)與臨床病理學(xué)參數(shù)、微血管及淋巴管生成的關(guān)系，尋找影響患者預(yù)后的因素，為腫瘤的抗微血管和淋巴管生成的基因治療提供依據(jù)。
　　 方法：按我們制定的標(biāo)準(zhǔn)搜集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院2004年7月～2010年1月的46例腎母細(xì)胞瘤患兒的石蠟包埋標(biāo)本。其中男性20例，女性26例，年齡8月～13歲，中位年齡35.5月，根據(jù)美國Wilms瘤研究組臨床分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ～Ⅱ期29例，Ⅲ～Ⅴ期17例

2、。病理分型：預(yù)后良好型38例，預(yù)后不良型8例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者13例，血管浸潤者12例。另外，從上述46例中選擇19例瘤旁組織(距瘤體邊緣≥3cm)和8例正常腎組織標(biāo)本作為參照。查證并記錄46例入選病例的一般情況、診斷、手術(shù)處理情況、臨床分期、病理分型及分化、術(shù)前/后化療情況等，通過患者門診復(fù)查結(jié)合電話隨訪收集相關(guān)預(yù)后資料。采用免疫組織化學(xué)方法測定正常腎組織、瘤旁組織和腎母細(xì)胞瘤組織中的CD68、VEGF-C、CD34和LYVE-1的表達(dá)情

3、況，并進(jìn)行TAM計數(shù)、微血管密度(MVD)和淋巴管密度(LVD)計數(shù)。采用單因素分析TAM計數(shù)、VEGF-C表達(dá)、MVD和LVD與小兒腎母細(xì)胞瘤臨床病理特征的關(guān)系；采用Kaplan-Meier法和Log-rank檢驗評價TAM計數(shù)、VEGF-C表達(dá)、MVD和LVD與患者預(yù)后的關(guān)系，并用Cox比例風(fēng)險模型進(jìn)行多因素分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.CD68陽性蛋白的表達(dá)與TAM計數(shù)CD68陽性蛋白表達(dá)于TAM的細(xì)胞漿中，呈清

4、晰的棕黃色顆粒狀。在正常腎組織、瘤旁組織和腎母細(xì)胞瘤組織中的計數(shù)分別為9.38±4.10個/HP、18.05±5.85個/HP和33.13±8.71個/HP。三種組織中的TAM計數(shù)有顯著性差異。
　　 2.VEGF-C陽性蛋白分布與表達(dá)VEGF-C陽性蛋白表達(dá)于細(xì)胞胞質(zhì)和間質(zhì)中，呈現(xiàn)清晰的棕黃色顆粒。按照分級標(biāo)準(zhǔn)，在正常腎組織、瘤旁組織和腎母細(xì)胞瘤組織中的VEGF-C高表達(dá)率分別為12.50％、68.42％和73.91％。VEG

5、F-C在三種組織中的高表達(dá)率有顯著性差異。
　　 3.CD34、LYVE-1蛋白的表達(dá)及MVD和LVD計數(shù)CD34陽性蛋白選擇性地顯示腫瘤內(nèi)的血管內(nèi)皮細(xì)胞，呈棕褐色，在正常腎組織、瘤旁組織和腎母細(xì)胞瘤組織中MVD的平均值分別為8.25±2.82個/HP，14.63±3.92個/HP和16.98±3.74個/HP。三種組織中的MVD有顯著性差異。LYVE-1陽性蛋白特異性標(biāo)記淋巴管也呈棕褐色管狀結(jié)構(gòu)。三種組織中LVD平均值分別為2

6、.75±1.58個/HP、5.26±2.26個/HP和4.72±1.88個/HP，三種組織中的LVD差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 4.TAM高密度、VEGF-C高表達(dá)、MVD和LVD與臨床病理特征之間的關(guān)系單因素分析顯示TAM高密度與腎母細(xì)胞瘤的臨床分期和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)、而與患者的性別、年齡和腫瘤大小無關(guān)；VEGF-C高表達(dá)與腫瘤的臨床分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和有無血管浸潤有關(guān)，而與患者的性別、年齡和腫瘤大小無關(guān)；MVD和LVD與腎

7、母細(xì)胞瘤臨床分期、是否有血管浸澗和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，與患者的性別、年齡無關(guān)。另外，MVD還與腫瘤的大小有關(guān)。
　　 5.TAM計數(shù)、VEGF-C表達(dá)與MVD和LVD的相關(guān)關(guān)系經(jīng)Person和Spearman等級相關(guān)(與VEGF-C相關(guān)的指標(biāo))分析，TAM計數(shù)與LVD和MVD有正相關(guān)關(guān)系(r=0.395，P=0.006；r=0.308，P=0.024)，VEGF-C的表達(dá)與LVD和MVD有正相關(guān)關(guān)系(r=0.495，P=0.00

8、6；r=0.308，P=0.024.)。同樣VEGF-C和TAM計數(shù)之間也存在正相關(guān)(r=0.603，P=0.012)。
　　 6.TAM計數(shù)、VEGF-C表達(dá)、MVD和LVD與患兒生存的關(guān)系Kaplan-Meier法和Log-rank檢驗評價各參數(shù)與患兒的生存情況的關(guān)系。以TAM計數(shù)的平均值為界，≥33的中位生存時間為29個月，顯著低于<33者(40.5個月，x2=8.570，P=0.003)；VEGF-C高表達(dá)患兒的中位生存

9、時間為31個月，低于低表達(dá)者(41個月，x2=4.113，P=0.043)；以腫瘤組織MVD的平均值為界，≥17的中位生存時間為33個月，顯著低于<17者(39個月，x2=4.321，P=0.038)；以腫瘤組織LVD的平均值為界，≥5的中位生存時間為32個月，低于<5者(41個月，x2=4.588，P=0.032)。
　　 7.Cox多因素分析結(jié)果以患兒性別、年齡、腫瘤大小、臨床分期、病理分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管浸潤，化療程數(shù)、

10、TAM計數(shù)、VEGF-C表達(dá)、MVD和LVD等為變量，采用向前引入法行Cox多因素分析顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和VEGF-C高表達(dá)是影響患者生存的獨立危險因素，化療程數(shù)是影響患者生存的獨立保護(hù)因素，而性別、年齡、腫瘤大小、臨床分期、病理分型、MVD和LVD均不是影響生存率的獨立因素。
　　 結(jié)論：
　　 1.腎母細(xì)胞瘤組織中TAM浸潤密度與患者性別、年齡、腫瘤大小、病理分型和有無血管浸潤無關(guān)，而與腫瘤的臨床分期和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有

11、關(guān)；
　　 2.腎母細(xì)胞瘤組織中VEGF-C蛋白高表達(dá)，與患者性別、年齡、腫瘤大小和病理分型無關(guān)，而與腫瘤的臨床分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和有無血管浸潤均有關(guān)；
　　 3.腎母細(xì)胞瘤組織中TAM高密度浸潤和VEGF-C蛋白高表達(dá)對腫瘤組織微血管和淋巴管新生有促進(jìn)作用，特別是在腫瘤細(xì)胞淋巴道轉(zhuǎn)移中可能具有協(xié)同作用；
　　 4.TAM高密度浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響腎母細(xì)胞瘤患者生存的獨立危險因素，化療程數(shù)是影響其生存的獨立保