骨髓細(xì)胞在小鼠實(shí)驗(yàn)性腎小球腎炎中的作用.pdf

1、目的：本研究旨在觀察骨髓細(xì)胞是否可以分化成為竹葉青蛇毒導(dǎo)致的系膜增生型腎小球腎炎小鼠中的腎小球細(xì)胞，同時(shí)觀察中藥川芎嗪和GM-CSF，促進(jìn)骨髓細(xì)胞增殖因素，對(duì)骨髓細(xì)胞向腎小球細(xì)胞分化的影響。 方法：綠色熒光蛋白(GFP)標(biāo)記的C57BL/6轉(zhuǎn)基因小鼠提供骨髓，同種無熒光標(biāo)記的普通C57BL/6小鼠隨機(jī)分為6組：①正常對(duì)照組：小鼠不進(jìn)行任何處理，提供正常小鼠的各種參考值及進(jìn)行腎臟組織的各種對(duì)照。②骨髓移植組：受體鼠在<'60>Co

2、全身均勻照射后六小時(shí)內(nèi)接受供體的GFP標(biāo)記的骨髓細(xì)胞，五周后觀察受體鼠的血常規(guī)及進(jìn)行其骨髓細(xì)胞的流式細(xì)胞儀檢測(cè)，以明確受體鼠的骨髓重建是否成功。③骨髓移植+竹葉青蛇毒組：受體鼠在接受骨髓移植后的五周通過尾靜脈注射竹葉青蛇毒誘發(fā)系膜增生型腎小球腎炎，竹葉青蛇毒注射后的第7、14、28、56天觀察受體鼠腎臟中的綠色熒光。④骨髓移植+竹葉青蛇毒+GM-CSF組：骨髓移植后的受體鼠在竹葉青蛇毒注射后連續(xù)腹腔注射GM-CSF一周，在上述各時(shí)間點(diǎn)觀

3、察腎臟組織中的綠色熒光。⑤骨髓移植+竹葉青蛇毒+川芎嗪組：骨髓移植后的受體鼠在竹葉青蛇毒注射后連續(xù)腹腔注射川芎嗪一周，在上述各時(shí)間點(diǎn)觀察腎臟組織中的綠色熒光。⑥骨髓移植+竹葉青蛇毒+GM-CSF+川芎嗪組：骨髓移植后的受體鼠在竹葉青蛇毒注射后連續(xù)腹腔注射GM-CSF及川芎嗪一周，在上述各時(shí)間點(diǎn)觀察。腎臟組織中的綠色熒光。以上各組中小鼠分別在不同時(shí)間點(diǎn)取腎，制備冰凍切片和石蠟切片，并采用免疫熒光組織化學(xué)雙標(biāo)和免疫組織化學(xué)等方法在激光共聚焦

4、顯微鏡和光鏡下觀察受體鼠腎臟中綠色熒光的的分布、數(shù)量和進(jìn)一步鑒別其細(xì)胞類型。 結(jié)果： <'60>Co全身均勻照射后進(jìn)行骨髓細(xì)胞移植的骨髓移植組小鼠的活動(dòng)與飲食與正常小鼠無明顯差別，只是毛發(fā)漸變灰白，五周后其血常規(guī)與正常鼠相較無明顯差異，流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示其骨髓細(xì)胞中GFP陽性細(xì)胞的比例也達(dá)到59.62±13.21％，提示骨髓重建成功。在熒光顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡下觀察不同組受體鼠不同時(shí)間的腎臟組織的冰凍切片，發(fā)現(xiàn)：②、③組受體

5、鼠腎小球內(nèi)在不同時(shí)間點(diǎn)均未見到綠色熒光，但個(gè)別腎小管處有少量綠色熒光；④、⑤、⑥組受體鼠在不同時(shí)間點(diǎn)時(shí)其腎小球內(nèi)均可見到少量綠色熒光，且似乎⑥組受體鼠腎小球內(nèi)的綠色熒光較多。GFP免疫組織化學(xué)的結(jié)果與上述相同，個(gè)別腎小管上皮細(xì)胞和腎小球內(nèi)少量細(xì)胞呈胞質(zhì)棕褐，核大紫藍(lán)色，似乎為外源性GFP陽性細(xì)胞。為了進(jìn)一步鑒別受體鼠腎小球內(nèi)GFP陽性細(xì)胞的種類，進(jìn)行了免疫熒光組織化學(xué)雙染色，結(jié)果顯示：④、⑤、⑥組受體鼠腎小球內(nèi)的GFP陽性細(xì)胞可能是腎小