rHDL抑制CACs衰老的機制研究.pdf

1、目的：
　　 循環(huán)成血管細胞(circulating angiogenic cells,CACs)參與新生血管的形成和動脈修復。高密度脂蛋白(HDL)可提高CACs的活性,但其中的調(diào)節(jié)機制迄今仍不清楚。本研究旨在闡述rHDL是通過什么分子機制來影響CACs衰老的。
　　 方法
　　 1、從健康志愿者外周血中分離單個核細胞,并誘導分化培養(yǎng)為CACs。
　　 2、CACs與rHDL共培養(yǎng)后(加或不加雷帕霉素)

2、,用β-半乳糖苷酶染色法檢測CACs衰老程度。
　　 3、Western Blot和免疫沉淀法檢測mTOR磷酸化、mTOR—rictor復合物形成和mTOR—rictor依賴的Akt活化。
　　 4、免疫細胞組織化學法、RT-PCR及Western Blot檢測人端粒酶逆轉錄酶(hTERT)的核轉位,試劑盒檢測核端粒酶活性。
　　 結果
　　 1、rHDL可減弱CACs的衰老,然而此效應可被哺乳動物雷帕霉

3、素靶蛋白(mTOR)抑制劑雷帕霉素所阻斷。
　　 2、rHDL能促使mTOR發(fā)生磷酸化、mTOR-rictor復合物形成和mTOR-rictor依賴的Akt活化；促使人端粒酶逆轉錄酶(hTERT)的核轉位增加及核端粒酶活性增強。
　　 3、用SiRNA抑Nrictor基因表達后,mTOR-rictor復合物形成和Akt活化均被阻斷,同時rHDL對CACs衰老的抑制作用和核端粒酶活性的提高作用均被抑制。
　　 結論