大菱鲆紅體病虹彩病毒的核酸探針檢測及病毒感染牙鲆鰓細胞系的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、大菱鲆(Scophthalmus maximus)是優(yōu)質(zhì)的海水魚類養(yǎng)殖品種,近年來大菱鲆的工廠化養(yǎng)殖在我國北方沿海地區(qū)迅猛發(fā)展,成為我國北方重要的海水魚類養(yǎng) 殖產(chǎn)業(yè)。然而,目前我國養(yǎng)殖大菱鲆的病害問題卻越來越嚴重,已經(jīng)威脅其健康發(fā)展。2001年,在我國多個大菱鲆養(yǎng)殖場開始流行一種可導(dǎo)致大菱鲆魚苗和養(yǎng)成魚大量死亡的疾病,患病和垂死的大菱鲆最主要的外觀特征是體表無明顯損傷,魚體無眼側(cè)(腹面)沿脊椎骨附近皮下淤血、發(fā)紅;患病嚴重時病魚鰭和鰭

2、基部也有彌散性出血,整個魚體腹面呈粉紅色。經(jīng)電鏡觀察,在病魚的鰓、腸、脾、腎等多個組織內(nèi)發(fā)現(xiàn)了一種似虹彩病毒(Iridovims-1ike)的嚴重感染。進一步的研究表明,該病毒是一種新的魚類虹彩病毒,暫命名為大菱鲆紅體病虹彩病毒(Turbot reddish body iridovirus,TRBIV)。 本研究針對該病病原大菱鲆紅體病虹彩病毒(TRBIV)建立了核酸探針檢測技術(shù)。應(yīng)用PCR技術(shù)制備了非放射性標記物地高辛(DIG

3、)標記的TRBIV DNA探針,通過核酸探針斑點雜交檢測方法對此探針特異性及靈敏度進行驗證,結(jié)果表明其對TRBIV重組質(zhì)粒pGAPZaA-MCP的檢出靈敏度為2.095 pg,相當于4.561×10<'5>個TRBIV重組質(zhì)粒pGAPZaA-MCP拷貝??蓹z出48 ng患紅體病大菱鲆腎組織勻漿液、23 ng感染紅體病病毒的大菱鲆脾組織勻漿液,而與健康大菱鲆組織勻漿液和組織DNA,LCDV DNA均不發(fā)生交叉反應(yīng)。 大菱鲆虹彩病毒

4、(Turbot reddish body iridovirus,TRBIV)是虹彩病毒科,腫大細胞病毒(Megalocytivirus),這個屬的病毒具有的特點是,不容易感染培養(yǎng)細胞,至今為止只有真鯛虹彩病毒感染培養(yǎng)細胞成功的報道(Oshima et al,1998)。而TRBIV作為一種新的魚類虹彩病毒分離株,國內(nèi)外尚未有其敏感細胞系的研究報道。本論文開展了大菱鲆紅體病病毒(TRBlV)感染牙鲆鰓細胞系(Flounder gill c

5、ell line,F(xiàn)G)的研究。FG細胞在接種TRBIV后出現(xiàn)了典型的細胞病變(Cytopathic effect,CPE),通過電子顯微鏡對感染細胞進行觀察,發(fā)現(xiàn)感染細胞中有病毒粒子,衣殼呈典型的六角形,核心大小為60~80 nm,在細胞內(nèi)空泡中發(fā)現(xiàn)大量的未完全裝配的空的病毒衣殼,這是在病毒復(fù)制過程中生成的。同時觀察到病毒通過裂解細胞而大量釋放。表明病毒在FG細胞中進行了復(fù)制并完成了復(fù)制循環(huán)。在20℃和24℃培養(yǎng)條件下,對病毒的形態(tài)和

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